[發明專利]一種長牡蠣白介素IL17N重組蛋白及其制備和應用

在審

• 申請號: 201410687340.6
• 申請日: 2014-11-25
• 公開（公告）號: CN104402987A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 宋林生;辛魯生;王玲玲;劉瑞
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C07K14/54
• 分類號: C07K14/54;C12N15/70;A23K1/17;A61K38/20;A61P31/04;A61P35/00
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種長牡蠣白介素IL17N重組蛋白及其制備和應用。

背景技術

白介素17是高等動物中一類重要的炎癥細胞因子，在機體免疫調節系統中發揮著重要的作用，目前已在高等哺乳動物中發現了五大類白介素亞家族成員，其中IL17A及IL17F的功能研究的比較清楚，其他成員的功能還有待進一步的研究。白介素17可以上調免疫相關基因的表達，加速體內病原的清除。白介素17的失調會造成機體的許多炎癥反應以及自身免疫性疾病，諸如牛皮癬，風濕性關節炎及腦脊髓炎等。

目前研究發現白介素17存在于腫瘤組織中，對腫瘤組織的微環境起到了調節作用。高等動物中白介素17對腫瘤組織起到了雙重作用，一方面可以通過激活細胞毒性T細胞、自然殺傷細胞等對腫瘤起到抑制的作用，另一方面白介素17可以激活IL6和STAT3信號通路，誘導VEGF及TGF-β的表達，利于腫瘤細胞的轉移和生長。

貝類是我國重要的海水養殖生物，近年來養殖貝類病害頻發，對我國海水養殖業造成重大的經濟損失。從貝類自身的免疫防御系統入手，闡明其白介素17等細胞因子的分子功能及其對機體的免疫調節作用，將為病害防治和良種選育提供新思路。由于貝類進化地位較原始，其分子功能分化不完全，同一個蛋白往往兼具多種生物學功能，因此貝類的功能基因具有誘人的開發利用潛力。

發明內容

本發明目的在于提供一種長牡蠣白介素IL17N重組蛋白及其制備和應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種長牡蠣白介素IL17N重組蛋白，長牡蠣白介素IL17N重組蛋白為序列表SEQ?ID?NO.1中氨基酸序列所示。

一種長牡蠣白介素IL17N基因重組蛋白的制備方法，

(1)以長牡蠣白介素基因編碼區為模板，采用P1和P2引物進行PCR擴增，待用；

(2)上述PCR擴增產物與pMD19-T?Simple載體通過T4連接酶連接，轉化，測序鑒定重組子；

(3)采用NdeI、BamHI對上述的重組子及pMAL-C5X進行酶切,酶切片段通過T4連接酶連接，轉化，測序鑒定重組子；

(4)將上述構建重組子轉入Transetta?DE3表達菌株中進行誘導培養，而后純化，即得到具有序列表SEQ?ID?NO.1中氨基酸序列的重組蛋白IL17N；

所述引物P1和P2分別為：

P1：5’-GACATATGATGAATGCCCCTGTCTGGCT-3’；

P2：5’-GAGGATCCTTAGCTGGGTCTCTGGACGG-3’。

一種長牡蠣IL17N基因重組蛋白的應用，所述序列表SEQ?ID?NO.1中氨基酸序列所示的重組蛋白IL17N用于制備抑菌劑或飼料添加劑。

所述序列表SEQ?ID?NO.1中氨基酸序列所示的重組蛋白IL17N用于制備抑制革蘭氏陰性菌或革蘭氏陽性菌的的抑菌劑。

一種長牡蠣IL17N基因重組蛋白的應用，所述序列表SEQ?ID?NO.1中氨基酸序列所示的重組蛋白IL17N用于制備抗腫瘤的藥物。

所述序列表SEQ?ID?NO.1中氨基酸序列所示的重組蛋白IL17N用于制備抗小鼠肺纖維瘤細胞的藥物。

本發明所具有的優點：

本發明利用體外重組表達技術獲得了長牡蠣白介素IL17N重組蛋白，該重組蛋白能抑制大腸桿菌和藤黃微球菌的生長，并對小鼠肺纖維瘤細胞L929具有明顯的殺傷作用。同時在開發廣譜抗菌類藥物、飼料添加劑和抗腫瘤藥物等方面具有潛在應用價值。

附圖說明

圖1為本發明實施例提供的長牡蠣IL17N基因重組蛋白對小鼠肺纖維瘤細胞L929生長的抑制作用圖。

圖2為本發明實施例提供的長牡蠣IL17N基因重組蛋白對大腸桿菌和藤黃微球菌生長的抑制作用圖。

具體實施方式

下面的實驗例中將對本發明作進一步的闡述，但本發明不限于此。

實施例1

長牡蠣IL17N基因編碼區的體外原核重組表達，包括下列步驟：

1、重組載體的構建

本發明中采用的重組載體為NEB公司的pMAL-C5X原核表達載體。