[發明專利]一種白細胞介素21和4-1BBL誘導外周血單個核細胞中NK細胞增殖的方法

有效

• 申請號: 201410686184.1
• 申請日: 2014-11-25
• 公開（公告）號: CN105602899B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 高斌;何琛輝;李小梅
• 申請（專利權）人: 天津天銳生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N11/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;陳曉慶

本發明公開了一種白細胞介素21和4?1BBL誘導外周血單個核細胞中NK細胞增殖的方法。該方法包括如下步驟：將初始NK細胞與固相化的細胞因子共培養，使NK細胞增殖。實驗結果表明：利用固定化的細胞因子直接刺激未經篩選的人外周血中的淋巴細胞群，大量擴增了具有殺傷活性的原代NK細胞，并將刺激NK細胞的信號傳導轉化為人為可控的形式，在臨床上為NK細胞治療提供了安全有效、便利且效果穩定的擴增方案，并為隨后的改造NK細胞和研究信號傳導機制提供基礎研究。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種白細胞介素21和4-1BBL誘導外周血單個核細胞中NK細胞增殖的方法。

背景技術

自然殺傷細胞(natural killer cells,NK細胞)是淋巴細胞的一個亞群，占外周血淋巴細胞總數的10％～15％。常用的人NK細胞的表型標志是CD56⁺、CD16⁺、CD19^‐、CD3^‐，與T細胞的表型(TCRαβ或TCRδγ或CD3⁺)和B細胞的表型(CD19⁺或BCR)有顯著差異。NK是不同于T、B細胞，具有直接殺傷靶細胞效應的一類淋巴細胞，其對靶細胞的殺傷作用表現為一種速發效應，無須預先致敏，與靶細胞混合后4小時內即發揮殺傷效應。NK細胞殺傷效應的機制與細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic lymphocyte，CTL)相似，靶細胞包括腫瘤細胞、病毒或細菌感染的細胞及機體某些正常的細胞。NK細胞具有抗腫瘤、抗感染、免疫調節等功能，并參與移植排斥反應，自身免疫病和超敏反應發生。

當前有多種增強NK細胞殺傷腫瘤細胞效益的策略，已知部分的細胞因子比如白介素2，白介素12，白介素15，白介素18，白介素21和I型干擾素(IFN-αand IFN-β)均通過直接或間接激活的作用活化擴增NK細胞。4-1BB/4-1BBL(CD137/CD137L)是一種協同刺激分子。在廣義上，協同刺激分子通道是一種依賴細胞膜表面糖蛋白交互作用的細胞間信號傳遞方式。在結構上4-1BB/4-1BBL屬于腫瘤壞死因子(TNFR/TNF)家族，TNFR/TNF家族有超過27個成員，大多數以三聚體的膜分子或可溶性分子形式發揮作用。含有受體相關因子(TRAF)結合域的4-1BBL分子的胞質尾區以受體配體的方式結合到4-1BB上(TRAFs)，隨后激活下游信號。有文獻報道，伴隨NK細胞FcRγIII(CD16)識別靶細胞后，4-1BB/4-1BBL作為協同刺激分子在功能上誘導細胞的活化增殖、抗凋亡作用，尤其是促使NK細胞釋放IFN-γ等細胞因子并誘導ADCC作用。此外，目前已知4-1BBL激發的腫瘤特異性的細胞毒性T淋巴細胞，能產生長久的抗腫瘤效應，也由此被廣泛應用到CAR-T細胞治療中。

免疫磁珠(Immunomagnetic beads,IMB)由載體微球和免疫配基結合而成。載體微球可由不同的制備材料和方法形成疏水-親水、非極性-極性和帶正電荷-帶負電荷等不同物理性質。球體內核或夾層添加磁性氧化鐵后成為磁性微球，磁珠外層通常包裹以無生物毒性的高分子材料，化學功能由外殼的配基來實現，相關基團常見的有羧基、氨基、環氧基等。再結合免疫活性的功能基團(如抗體、抗原及親和素類的擴鏈劑等)，利用特異性的免疫學反應結合目的物(如蛋白、細胞、RNA及多種小分子)，在磁力作用下，發生力學移動，從混合溶液中將特異性結合的物質分離開。具有分離速度快、效率高，可重復性好，操作簡單，無需昂貴儀器設備的特點。

上個世紀70年代中期免疫磁珠被發現以來，人們利用其固相化的優點以及免疫學反應的特異性，不斷廣泛地應用于各個領域中，尤其在免疫細胞分離、細胞培養、免疫吸附、檢測細菌和其他微生物方面的應用，甚至創造了相當的產業價值。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種增殖NK細胞的方法。

本發明提供的增殖NK細胞的方法包括如下步驟：將初始NK細胞與固相化的細胞因子共培養，使NK細胞增殖。