[發明專利]一種單組份酶底物顯色液

有效

• 申請號: 201410685230.6
• 申請日: 2014-11-25
• 公開（公告）號: CN104458717A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 葉正義;陶家春;何遠立;楊秦
• 申請（專利權）人: 成都威爾諾生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及酶底物顯色液領域，具體地，涉及一種單組份酶底物顯色液。

背景技術

??酶底物即TMB，用于ELISA反應。底物產生一種可溶性淡藍色的末端產物，可在370或635nm在分光光度計上讀取。其適用于酶聯免疫反應中的顯色階段的定量和定性分析。其檢驗的原理是：當標記在抗體或抗原上的酶與顯色液中的酶底物、雙氧水等反應，加入終止液后溶液由無色變成黃色，黃色深淺反應ELISA體系中抗原抗體結合的多少，從而判斷某種抗原或抗體的多少。在通過酶標儀測度吸光值，判斷免疫反應的程度。

現有市售的酶聯免疫試劑盒所采用酶底物顯色劑液大多為雙組份，分A液和B液，使用之前需要先混勻，在使用上存在缺點一是不夠方便，二是在包裝材料上存在成本提高和資源浪費；三是使用中的混合過程容易造成批間質量不均一；四是還存在穩定性差、保存時間短、顯色背景高、靈敏度低等的缺點。

現有技術的酶底物顯色液及其制備方法，由A液和B液等體積混合后得到，所述A液各組分的摩爾濃度為：檸檬酸0.01-0.5mol/L，磷酸氫二鈉0.01-0.5mol/L，過氧化氫0.01-0.5mol/L，EDTA0.1-1mmol/L；所述B液包括酶底物、HCl和聚乙烯吡咯烷酮，所述酶底物的摩爾濃度為0.1-1mmol/L，所述HCl的摩爾濃度為0.01-0.5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的質量分數為0.1-10%。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種單組份酶底物顯色液，以克服現有顯色液操作麻煩、靈敏度低的問題。

此外，本發明還包括上述單組份酶底物顯色液的應用。

本發明解決上述問題所采用的技術方案是：一種單組份酶底物顯色液，其特征在于，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉0.1-0.5g，甘油20-30ml，?酶底物5-40mg，乙醇10-30mL。

現有的酶底物顯色液一般都是由A液和B液混合得到，A液各組分的摩爾濃度為：檸檬酸0.01-0.5mol/L，磷酸氫二鈉0.01-0.5mol/L，過氧化氫0.01-0.5mol/L，EDTA0.1-1mmol/L；所述B液包括酶底物、HCl和聚乙烯吡咯烷酮，所述酶底物的摩爾濃度為0.1-1mmol/L，所述HCl的摩爾濃度為0.01-0.5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的質量分數為0.1-10%，現有酶底物顯色劑的缺點在于A、B兩種液體在顯色之前需要等體積混勻，操作不方便、耗時間、效率較低、批此之間存在差異，同時成本也高，且A液B液自混合的過程中，HCl會揮發，會導致顯色的有效成分的濃度發生改變，因而會導致混合后的酶底物顯色液的在顯色過程中的靈敏度降低；本發明為單組份酶底物顯色液，避免了酶底物顯色液在使用之間需要將A、B液混合的操作步驟，簡化操作流程，減少了操作時間，提高了效率，同時避免了因A、B液不同批次間的差異導致混合的顯色劑的顯色效果；并且，不會存在因HCl揮發導致的酶底物顯色液的有效顯色成分的濃度發生改變，進而提高了酶底物顯色液的靈敏度；本發明用過硼酸鈉替代現有的過氧化氫、過氧化脲，實驗證明，與過氧化氫、過氧化脲相比，過硼酸鈉具有更好的氧化性。

進一步地，檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g。

實驗證明，檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g的1000mL單組份酶底物顯色液具有更好的穩定性。

進一步地，酶底物的質量設置為10-30mg。將酶底物的質量設置為10-30mg能有效的提高顯色效果，提高顯色的靈敏度。

進一步地，過硼酸鈉為0.4-0.5g。

實驗證明，過硼酸鈉為0.4-0.5g的1000mL單組份酶底物顯色液具有更好的顯色效果。

一種如權利要單組份酶底物顯色液的應用，其特征在于，將所述的單組份酶底物顯色液應用到酶聯免疫試劑盒。

綜上，本發明的有益效果是：

1、本發明用過硼酸鈉替代現有的過氧化氫、過氧化脲，與過氧化氫、過氧化脲相比，過硼酸鈉具有更好的氧化性，過硼酸鈉提高了單組份酶底物顯色液的顯色效果。

2、通過將本發明所述范圍內的單組份酶底物顯色液用于酶聯免疫反應中的顯色階段，避免了酶底物顯色液在使用之間需要將A、B液混合的操作步驟，簡化操作流程，減少了操作時間，提高了效率，同時避免了因A、B液不同批次間的差異導致混合的顯色劑的顯色效果。