[發明專利]一種用于酶聯免疫反應的單組份TMB顯色液

有效

• 申請號: 201410685176.5
• 申請日: 2014-11-25
• 公開（公告）號: CN104459109A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 張志新;葉正義;楊秦;何遠立
• 申請（專利權）人: 成都威爾諾生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及TMB顯色液領域，具體地，涉及一種用于酶聯免疫反應的單組份TMB顯色液。

背景技術

??TMB是一種過氧化物酶底物，用于ELISA反應。底物產生一種可溶性淡藍色的末端產物，可在370或635nm在分光光度計上讀取。其適用于酶聯免疫反應中的顯色階段的定量和定性分析。其檢驗的原理是：當標記在抗體或抗原上的酶與顯色液中的TMB、雙氧水等反應，加入終止液后溶液由無色變成黃色，黃色深淺反應ELISA體系中抗原抗體結合的多少，從而判斷某種抗原或抗體的多少。在通過酶標儀測度吸光值，判斷免疫反應的程度。

現有市售的酶聯免疫試劑盒所采用TMB顯色劑液大多為雙組份，分A液和B液，使用之前需要先混勻，在使用上存在缺點一是不夠方便，二是在包裝材料上存在成本提高和資源浪費；三是使用中的混合過程容易造成批間質量不均一；四是還存在穩定性差、保存時間短、顯色背景高、靈敏度低等的缺點，市售的酶聯免疫試劑盒也有采用單組份的TMB顯色液，但是現有的單組份TMB顯色液的穩定性不是不是特別好。

現有技術的TMB顯色液及其制備方法，由A液和B液等體積混合后得到，所述A液各組分的摩爾濃度為：檸檬酸0.01-0.5mol/L，磷酸氫二鈉0.01-0.5mol/L，過氧化氫0.01-0.5mol/L，EDTA0.1-1mmol/L；所述B液包括TMB、HCl和聚乙烯吡咯烷酮，所述TMB的摩爾濃度為0.1-1mmol/L，所述HCl的摩爾濃度為0.01-0.5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的質量分數為0.1-10%；現有的單組份TMB顯色液的氧化劑為過氧化脲。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種用于酶聯免疫反應的單組份TMB顯色液，以克服現有顯色液操作麻煩、穩定性差的問題。

此外，本發明還包括上述單組份TMB顯色液的應用。

本發明解決上述問題所采用的技術方案是：一種用于酶聯免疫反應的單組份TMB顯色液，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉0.1-0.5g，甘油20-30ml，TMB5-40mg，10-40mlDMSO，每1000mL所述氧化效果好的單組份TMB顯色液中還包括EDTA1-3g。

現有的TMB顯色液一般都是由A液和B液混合得到，A液各組分的摩爾濃度為：檸檬酸0.01-0.5mol/L，磷酸氫二鈉0.01-0.5mol/L，過氧化氫0.01-0.5mol/L，EDTA0.1-1mmol/L；所述B液包括TMB、HCl和聚乙烯吡咯烷酮，所述TMB的摩爾濃度為0.1-1mmol/L，所述HCl的摩爾濃度為0.01-0.5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的質量分數為0.1-10%，現有TMB顯色劑的缺點在于A、B兩種液體在顯色之前需要等體積混勻，操作不方便、耗時間、效率較低、批此之間存在差異，同時成本也高，且A液B液自混合的過程中，HCl會揮發，會導致顯色的有效成分的濃度發生改變，因而會導致混合后的TMB顯色液的在顯色過程中的靈敏度降低；本發明為單組份TMB顯色液，避免了TMB顯色液在使用之間需要將A、B液混合的操作步驟，簡化操作流程，減少了操作時間，提高了效率，同時避免了因A、B液不同批次間的差異導致混合的顯色劑的顯色效果；不會存在因HCl揮發導致的TMB顯色液的有效顯色成分的濃度發生改變，進而提高了TMB顯色液的靈敏度；并且，本發明在TMB顯色液中加入加入了1-3g的EDTA，實驗證明，EDTA的加入提高了TMB顯色液的穩定性；本發明用過硼酸鈉替代現有的過氧化氫、過氧化脲，實驗證明，與過氧化氫、過氧化脲相比，過硼酸鈉具有更好的氧化性；本發明將傳統溶劑乙醇替換成DMSO，DMSO為一種極性非質子溶劑，具有較好的滲透性，能與有機溶劑、水互溶，因此，DMSO能加快TMB的溶解，使之溶解的更充分，且使溶解后的溶液更穩定。

進一步地，檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g。

實驗證明，檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g的TMB顯色液具有更好的穩定性。

進一步地，DMSO為20-30mL。20-30mL的DMSO具有較快的溶解速度，溶解的更充分，穩定性更好。

進一步地，TMB的質量設置為10-30mg。將TMB的質量設置為10-30mg能有效的提高顯色效果，提高顯色的靈敏度。

一種用于酶聯免疫反應的單組份TMB顯色液的應用，將所述的單組份TMB顯色液應用到酶聯免疫試劑盒。

綜上，本發明的有益效果是：