[發(fā)明專利]用于檢測(cè)大腸桿菌O157：H7的顯色培養(yǎng)基

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410682521.X
• 申請(qǐng)日: 2014-11-24
• 公開（公告）號(hào): CN104388525A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金京勛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/10
• 分類號(hào): C12Q1/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種微生物檢測(cè)的培養(yǎng)基，尤其涉及一種用于檢測(cè)大腸桿菌O157:H7的顯色培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

出血性大腸桿菌(enterohemorrhage?E.Coli，EHEC)是大腸桿菌的一個(gè)亞型，EHEC分為157、26、111血清型，主要致病菌株為O157:H7，可引起感染性腹瀉，因能引起人類的出血性腸炎而得名。

EHEC?O157:H7除不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵山梨醇外，其他常見的生化特征與大腸埃希氏菌基本相似，但也有某些生化反應(yīng)不完全一致，具有鑒別意義。EHECO157:H7雖然有uidA基因，但其編碼的β-葡萄糖醛酸酶無活性，不能分解4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG)產(chǎn)生熒光，即MUG陰性。

EHEC?O157:H7的顯色培養(yǎng)基利用原理為大腸桿菌O157:H7不發(fā)酵或2天內(nèi)不發(fā)酵山梨醇以及表達(dá)β-半乳糖苷酶，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加山梨醇和β-半乳糖苷酶的顯色底物；在這種顯色培養(yǎng)基中，大腸桿菌菌落顯示發(fā)酵山梨醇的色澤，而EHEC?O157:H7呈現(xiàn)β-半乳糖苷酶顯色底物中顯色基團(tuán)的顏色。

研究發(fā)現(xiàn)，大腸桿菌中存在不發(fā)酵山梨醇，β-葡萄糖醛酸酶陽性，但EHECO157:H7血清也不凝集的菌株，給EHEC?O157:H7的顯色培養(yǎng)造成假陽性。目前，還沒有將用于檢測(cè)大腸桿菌O157：H7的顯色培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于檢測(cè)大腸桿菌O157：H7的顯色培養(yǎng)基。

本發(fā)明的所采用的技術(shù)方案為：

一種用于檢測(cè)大腸桿菌O157：H7的顯色培養(yǎng)基，每1000mL培養(yǎng)基含有瓊脂15-20g、蛋白胨5-15g、酵母提取物4-6g、氯化鈉5-10g，還含有山梨醇10-20g、肌醇4-7g、性紅0.005-0.03g、β-半乳糖苷酶顯色底物0.05-3g、4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸0.1-0.2g、異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷0.05-0.2g，牛膽鹽1-5g、亞碲酸鉀1-5mg、頭孢克肟0.01-0.06mg。

優(yōu)選的，β-半乳糖苷酶顯色底物為5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖。

優(yōu)選的，β-半乳糖苷酶顯色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖在1000mL培養(yǎng)基中的含量為0.1g。

優(yōu)選的，β-半乳糖苷酶顯色底物為鄰硝基苯-β-D-半乳糖苷。

優(yōu)選的，β-半乳糖苷酶顯色底物鄰硝基苯-β-D-半乳糖苷在1000mL培養(yǎng)基中的含量為2g。

優(yōu)選的，4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸在1000mL培養(yǎng)基中的含量為0.05-0.2g。

優(yōu)選的，4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸在1000mL培養(yǎng)基中的含量為0.15g。

優(yōu)選的，4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸在1000mL培養(yǎng)基中的含量為0.1g。

優(yōu)選的，用于檢測(cè)大腸桿菌O157：H7的顯色培養(yǎng)基，每1000mL培養(yǎng)基含有瓊脂15g、蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉5g，山梨醇15g、肌醇5g、性紅0.01g、鄰硝基苯-β-D-半乳糖苷2g、4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸0.1g、異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷0.1g、牛膽鹽1.5g、亞碲酸鉀2mg、頭孢克肟0.04mg。

優(yōu)選的，用于檢測(cè)大腸桿菌O157：H7的顯色培養(yǎng)基，每1000mL培養(yǎng)基含有瓊脂15g、蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉5g，山梨醇15g、肌醇5g、性紅0.01g、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖0.1g、4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸0.1g、異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷0.1g、牛膽鹽1.5g、亞碲酸鉀2mg、頭孢克肟0.04mg。

本發(fā)明在培養(yǎng)基中添加了山梨醇和中性紅，除大腸桿菌O157：H7外的大腸菌群發(fā)酵山梨醇產(chǎn)酸，在pH指示劑中性紅作用下顯示出紅色色澤，而大腸桿菌O157：H7不利用山梨醇而呈現(xiàn)無色菌落。

本發(fā)明在培養(yǎng)基中添加了β-半乳糖苷酶顯色底物Ⅰ和β-半乳糖苷酶顯色底物Ⅱ，大腸菌群在β-半乳糖苷酶作用下分解底物，游離出顯色劑，使菌落呈現(xiàn)出顯色劑的色澤。

膽鹽可抑制樣品中大部分的革蘭氏陽性球菌，包括牛膽鹽、豬膽鹽、三號(hào)膽鹽、去氧膽酸鈉和混合膽鹽。本發(fā)明在培養(yǎng)基中添加了膽鹽。

本發(fā)明在培養(yǎng)基中添加了，可抑制樣品中部分的革蘭氏陰性桿菌如大腸菌群以及容易擴(kuò)散生長(zhǎng)的變型桿菌的抗生素亞碲酸鉀和頭孢克肟。