[發(fā)明專利]大腸菌群選擇性顯色培養(yǎng)基及其檢測試紙

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410682129.5
• 申請日: 2014-11-24
• 公開（公告）號: CN104388524A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發(fā)明（設計）人: 金京勛
• 申請（專利權）人: 蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種適用于大腸菌群的選擇性顯色培養(yǎng)基，以及采用該選擇性顯色培養(yǎng)基的檢測試紙。

背景技術

大腸菌群是指在特定的培養(yǎng)條件下可以發(fā)酵乳糖、并能產酸產氣的一類需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。大腸菌群數(shù)的高低，表明食品受污染的程度，也反映攝入該食品對人體健康危害性的大小，所以檢測大腸菌群或大腸桿菌在食品衛(wèi)生學上具有廣泛意義，如何簡便、準確、快速地檢測食品中的大腸菌群，也是國內外食品衛(wèi)生工作者共同關注的課題，目前關于檢測大腸菌群的方法有許多，例如多管發(fā)酵法、膜過濾技術、酶活性檢測法、紙片法、免疫學方法(酶聯(lián)免疫吸附試驗和免疫熒光)和分子生物學方法等。這些方法都有一定的優(yōu)缺點，比如酶活性檢測法雖然比較省時省力，檢測特異性高，但成本較高；紙片法比較適用于現(xiàn)場監(jiān)測，節(jié)省了大量物力、人力，但準確性仍有待提高；PCR(Polymerase?Chain?React?ion)檢測法具有快速、特異、敏感等特點，但對實驗環(huán)境有特殊要求，容易受一些因素干擾，出現(xiàn)假陽性結果。

法國科瑪嘉公司開發(fā)出了用于大腸菌群檢測的顯色培養(yǎng)基，應用較為廣泛，這種培養(yǎng)基主要是利用微生物種屬特異性酶的特點，在培養(yǎng)基中加入相應的酶顯色底物，經微生物生長代謝產生的酶水解后游離出色原物質，使培養(yǎng)物顯特定顏色從而直接進行目標微生物篩選鑒別。此后，又陸續(xù)出現(xiàn)了其它一些大腸菌群顯色培養(yǎng)基產品，其中生物梅里埃公司的Coli?ID、RapidE-coli、Chromocultcoliforms等顯色培養(yǎng)基也有較大的市場影響。傳統(tǒng)微生物檢測法中對目標菌進行培養(yǎng)后還需要一系列繁瑣的驗證實驗，而顯色培養(yǎng)基克服了這一缺點，實現(xiàn)一歩培養(yǎng)直接鑒定，基本能夠滿足對大腸菌群初歩鑒定的需要，所以大腸菌群檢測顯色培養(yǎng)基的出現(xiàn)在大腸菌群實驗室鑒定技術中有著重要的意義。作為一項新型技術不僅要與國家的發(fā)展水平和該行業(yè)的技術水平及動態(tài)發(fā)展相協(xié)調，同時還應具有一定的普及推廣性，一個好的食品微生物檢測技術必須具備快速、準確、特異性及靈敏度高、省時省力和成本低等優(yōu)點，目前市面上常用的顯色培養(yǎng)基檢測產品雖然可能會滿足特異、敏感等檢測要求，但大多數(shù)顯色培養(yǎng)基產品都來源于國外生物試劑公司，其價格昂貴導致檢測成本增加以及購買的不便利性使這個新技術成為食品標準檢測方法的瓶頸，也遏制了國內的一些食品檢測行業(yè)對這一產品的實際需求。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供一種大腸菌群選擇性顯色培養(yǎng)基，以及采用該選擇性顯色培養(yǎng)基制作的檢測試紙，以克服現(xiàn)有技術存在的上述缺陷。

本發(fā)明首先涉及一種大腸菌群選擇性顯色培養(yǎng)基，其中每1000mL培養(yǎng)基含有如下重量的組分：

所述特異性酶顯色底物是4-甲基傘形酮-β-D-半乳糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的混合物，兩者的重量配比為0.2-1：1，優(yōu)選0.5-0.6：1。

本發(fā)明還涉及一種采用該選擇性顯色培養(yǎng)基制作的檢測試紙，其至少含有一吸附有上述大腸菌群選擇性顯色培養(yǎng)基的吸水濾紙。

本發(fā)明采用兩種特異性酶顯色底物進行復配使用，出乎意料的其對于大腸菌群的特異性和敏感度較單獨使用任何一種顯色底物顯著增強，且檢出率高、檢出時間短。

具體實施方式

下面給出本發(fā)明較佳實施例，以詳細說明本發(fā)明的技術方案。

實施例1

一種大腸菌群顯色培養(yǎng)基，每1000mL培養(yǎng)基含有：結晶紫中性紅膽鹽瓊脂15g、特異性酶顯色底物5g、二甲基甲酰胺0.05g、酵母粉1g、乳糖1g、氯化鈉5g、磷酸氫二鉀5g、磷酸二氫鉀2g、月桂基硫酸鈉0.3g。所述特異性酶顯色底物是4-甲基傘形酮-β-D-半乳糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的混合物，兩者的重量配比為0.5：1。

將上述成分溶于水至1000mL，加熱煮沸，120℃滅菌15min，即可使用。

實施例2

一種大腸菌群顯色培養(yǎng)基，每1000mL培養(yǎng)基含有：結晶紫中性紅膽鹽瓊脂25g、特異性酶顯色底物25g、二甲基甲酰胺20g、酵母粉5g、乳糖8g、氯化鈉10g、磷酸氫二鉀3g、磷酸二氫鉀0.5g、月桂基硫酸鈉0.1g。所述特異性酶顯色底物是4-甲基傘形酮-β-D-半乳糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的混合物，兩者的重量配比為0.6：1。

將上述成分溶于水至1000mL，加熱煮沸，120℃滅菌15min，即可使用。

實施例3