[發(fā)明專利]金黃色葡萄球菌選擇性顯色培養(yǎng)基及其檢測試紙

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410681446.5
• 申請日: 2014-11-24
• 公開（公告）號: CN104388526A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金京勛
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/14
• 分類號: C12Q1/14;C12R1/445
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種適用于金黃色葡萄球菌的選擇性顯色培養(yǎng)基，以及采用該選擇性顯色培養(yǎng)基的檢測試紙。

背景技術(shù)

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus?aureus)是引起葡萄菌屬食物中毒的主要病原微生物，也是影響世界各國經(jīng)濟(jì)的重要食源性疾病之一。人們攝取的食物和飲料中受到金黃色葡萄球菌污染時，將會產(chǎn)生一種或以上的腸毒素，引起食物中毒，常見的中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。研究發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌在自然界中廣泛存在，另外，金黃色葡萄球菌在人類和溫血動物的皮膚和鼻腔中均能存活。食品加工者和無癥狀攜帶者是食品污染的主要來源，生產(chǎn)過程中缺乏衛(wèi)生監(jiān)督管理容易有金黃色葡萄球菌及其腸毒素的存在。食品樣品中超過10⁶-10⁸CFU/g(mL)的金黃色葡萄球菌可引起食物中毒，而1g(mL)腸毒素，相當(dāng)于10⁵CFU/g(mL)的金黃色葡萄球菌，即可使敏感人群在1-6h后出現(xiàn)中毒癥狀。許多官方法規(guī)規(guī)定不同種類的食品允許低濃度的金黃色葡萄球菌存在中，例如雞蛋和熟食制品不需檢出，生肉及其制品中金黃色葡萄球菌最低限量為10²-10³CFU/g(mL)。

食品中金黃色葡萄球菌常規(guī)的檢驗(yàn)方法是在37℃環(huán)境下，金黃色葡萄球菌用選擇性肉湯濃縮富集24-48h后直接接種于選擇性培養(yǎng)基(如Baird.parker瓊脂)培養(yǎng)，隨后挑取可疑菌落經(jīng)血漿凝固酶試驗(yàn)進(jìn)行生化鑒定。傳統(tǒng)方法需要5-6天時間，其他相似的方法如最大可能數(shù)法(Most?Probable?Number，MPN)同樣耗時費(fèi)力，不能滿足快速檢測需求。尋找快速、簡單、準(zhǔn)確的金黃色葡萄球菌檢測方法是研究人員十分關(guān)注的課題。國內(nèi)外的研究者在食品安全快速檢測方面，已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，新的快速檢測技術(shù)逐漸應(yīng)用于食品安全快速檢測領(lǐng)域。目前，關(guān)于金黃色葡萄球菌及其腸毒素檢測的方法很多。常用的分子生物學(xué)方法主要有聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase?Chain?React?ion，PCR)、核酸探針技術(shù)、重組DNA技術(shù)以及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等，主要用于金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測，這類方法優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、特異性強(qiáng)，但是檢測方法復(fù)雜，需要昂貴的實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備以及專業(yè)技術(shù)人員操作，檢測成本相對較高，同時PCR擴(kuò)增產(chǎn)物容易引起實(shí)驗(yàn)室的污染等問題，也不利于在一般實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用。免疫學(xué)方法應(yīng)用較多的有乳膠凝集技術(shù)、酶聯(lián)免疫技術(shù)、免疫熒光技術(shù)以及免疫磁珠技術(shù)等，可以實(shí)現(xiàn)對病原微生物的快速檢測，本類技術(shù)具有操作簡單、高通量的優(yōu)點(diǎn)，在此基礎(chǔ)上研究出的自動熒光酶標(biāo)儀，可以極大程度地提高檢測的靈敏度和特異性，但由于儀器設(shè)備過于昂貴，也不利于在基層實(shí)驗(yàn)室的推廣應(yīng)用。新型的測試片法、顯色培養(yǎng)基法，以及生化試劑盒法都是在金黃色葡萄球菌傳統(tǒng)平板檢測方法改進(jìn)而來的。測試片是將顯色培養(yǎng)基附著在無紡布、濾紙等固體載體上，運(yùn)用測試卡片的技術(shù)制成的，自問世以來，以其便于攜帶、簡便、快速、特異性高等優(yōu)點(diǎn)為許多國家所采用，尤其適用于現(xiàn)場以及突發(fā)公共衛(wèi)生事件的快速檢測檢測。由于紙片面積小，微生物生長產(chǎn)生過多的粘液使相鄰菌落融合，使用時間較長時，無法準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。

顯色培養(yǎng)基的問世，是傳統(tǒng)平板檢測方法的一個重大突破。顯色培養(yǎng)基是建立在細(xì)胞內(nèi)生化反應(yīng)的基礎(chǔ)上，利用微生物自身代謝而產(chǎn)生特異性酶或其他特異性物質(zhì)，在培養(yǎng)基中添加相應(yīng)的顯色底物，使菌落呈現(xiàn)特定的顏色進(jìn)而實(shí)現(xiàn)分離和鑒別微生物的目的。目前，金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基產(chǎn)品比較成熟的主要有法國科瑪嘉公司的CHROMagar?Staphaureus、法國生物梅利埃公司的S?aureus?ID和BD公司的BBLTM?CHROMagarTM.Staph?aureust引。近年來，國內(nèi)一些生物科技公司也致力于金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基的研究。市面上常用的顯色培養(yǎng)基產(chǎn)品也有很高的特異性和靈敏度，但由于顯色培養(yǎng)基價格昂貴，檢測成本高及購買不方便，使其推廣應(yīng)用受到限制，不能滿足實(shí)際需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種適用于金黃色葡萄球菌的選擇性顯色培養(yǎng)基，以及采用該選擇性顯色培養(yǎng)基的檢測試紙，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。

本發(fā)明首先涉及一種金黃色葡萄球菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其中每1000mL培養(yǎng)基含有如下重量的組分：蛋白胨8-12g、酵母粉5-8g、丙酮酸鈉3-6g、氯化鈉55-90g、亞碲酸鉀30-45g、氯化鋰7-10g、瓊脂10-20g、復(fù)合特異性酶顯色底物0.2-0.5g、二甲基甲酰胺30-75g、抗生素0.04-0.08g、助顯色劑0.05-0.1g，余量為水。