[發明專利]一種利用羊肚菌制備吡咯酸化合物的方法及其應用

有效

• 申請號: 201410679109.2
• 申請日: 2014-11-24
• 公開（公告）號: CN104450818B
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 鄭永標;劉艷如;吳小君
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: C12P17/10
• 分類號: C12P17/10;A61K31/40;A61P39/06;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種利用羊肚菌制備吡咯酸化合物的方法，其特征在于：以羊肚菌為原料，經固體

發酵、產物有機浸提、分離純化得到吡咯酸化合物；包括以下步驟：

（1）固體發酵：將羊肚菌活化后進行固體發酵；然后進行培養；

（2）產物有機浸提：將步驟（1）培養得到的菌絲體與培養基用有機溶劑浸提；浸提液濃

縮后，用等體積的乙酸乙酯和水進行萃取；取乙酸乙酯相，經脫水、濃縮后，得到有機粗提物浸膏；

（3）分離純化：將有機粗提物浸膏用甲醇溶解后，進行凝膠柱層析；采用薄層層析-生物自顯影法檢測各組分的抗氧化活性，將具有抗氧化活性的組分收集、合并后，再進行反相硅膠柱層析，收集具有抗氧化活性的組分；最后再利用正相硅膠柱層析，得到具有抗氧化活性的吡咯酸化合物；

步驟（1）所述的培養條件為：培養基配方組成為：馬鈴薯16-25wt%，葡萄糖1.5-2.5wt%，蛋白胨0.5-1.5wt%，1-2wt% 瓊脂，余量為水；

其中所述羊肚菌，菌種為羊肚菌M.co 0010（Morehellaesculenta），已于2014 年7 月6 日保藏于中國武漢，武漢大學，中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC M 2014324；

其中所述得到的吡咯酸化合物為其分子式為C₅H₅NO₂，結構式為：。

2.根據權利要求1 所述的利用羊肚菌制備吡咯酸化合物的方法，其特征在于：步驟（1）

所述的培養其條件為自然pH，0.1 Mpa、100~140℃滅菌15~40 min，于25-28 ℃恒溫培養

25-35 天。

3.根據權利要求1所述的利用羊肚菌制備吡咯酸化合物的方法，其特征在于：步驟（2）

所述的有機溶劑為乙酸乙酯、甲醇、丙酮、冰乙酸中的一種或多種。

4.根據權利要求1 所述的利用羊肚菌制備吡咯酸化合物的方法，其特征在于：步驟（3）

所述的凝膠柱層析其參數為：Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠柱，甲醇洗脫，流速為12 s/滴，

每管收集5-10mL，每試管取樣進行薄層層析：展開劑為氯仿: 甲醇＝10:1，顯色劑為10wt%

的硫酸乙醇，相似組分進行合并。

5.根據權利要求1 所述的利用羊肚菌制備吡咯酸化合物的方法，其特征在于：步驟（3）

所述的反相硅膠柱層析其洗脫為：用甲醇與水的混合液作為洗脫劑，甲醇占混合液體積的

5-30%，混合液中含有體積分數為0.1-1% 的甲酸，進行梯度洗脫；所述的正相硅膠柱層析

其洗脫為：用氯仿與甲醇的混合液作為洗脫劑，體積比為40:1-120:1，洗脫劑中含有體積

分數為0.1-2‰的甲酸。