[發(fā)明專利]影響中國西門塔爾牛脂肪沉積的FDFT1基因關(guān)鍵位點

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410678775.4
• 申請日: 2014-11-24
• 公開（公告）號: CN104611349A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊潤軍;趙志輝;梁晶婕;房希碧;龍小娟;肖航;姜平
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12Q1/68
• 代理公司: 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

1.用于中國西門塔爾牛脂肪沉積性狀遺傳標(biāo)記的FGF-1基因，其特征在于：

核苷酸序列如序列表Seq?ID?NO.3和Seq?ID?NO.6所示，在序列表Seq?ID?NO.3第149?bp處有149T-149C的突變，導(dǎo)致Hae-III-RFLP多態(tài)性；在序列表Seq?ID?NO.6第390?bp處有390C-390T的突變，導(dǎo)致Hpa-II-RFLP多態(tài)性。

2.一種利用FDFT1基因檢測中國西門塔爾牛脂肪沉積性狀的分子標(biāo)記方法，其特征在于：

從中國西門塔爾牛血液中提取基因組DNA，根據(jù)中國西門塔爾牛FDFT1基因序列設(shè)計引物，得到的引物序列如下所示：

P1正向引物F：5'?CCTGGAGGACTTCCCAACGGTAG???3'，

???????P1反向引物R：5'?CCTGGAGAATGCTATGGACAGAGGG?3'；

???????P2正向引物F：5'?CTACTCGCCCATCTACCTGTCG??3'，

P2反向引物R：5'?TCACACCTGCTACATTCAAGTCC?3'；

用所示的特異性引物在中國西門塔爾牛基因組中進行PCR擴增，擴增基因產(chǎn)物純化、克隆測序，獲得如序列表SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列，其中分別包括FDFT1基因I4-130?T>C和E8-500?C>T的單核苷酸堿基突變，并且利用PCR-RFLP方法對中國西門塔爾牛群體中FDFT1基因2個SNPs進行了檢測。

3.如權(quán)利要求2所述中國西門塔爾牛脂肪沉積性狀相關(guān)FDFT1基因SNPs的檢測方法，其特征在于：

所述的PCR擴增條件是：25?μL反應(yīng)體系，包括DNA?模板（50?ng/μL）1?μL、上下游引物（10?μmol/L）各1?μL、dNTPs（2?mmol/L）2.5?μL、Taq?DNA?聚合酶（5?U/μL）0.3?μL、Mg2+（25?mmol/L）1.5?μL、10×PCR?緩沖液2.5?μL、超純水15.2?μL；?所述的PCR?擴增反應(yīng)程序為：95℃變性5?min，95℃變性30?s，57℃（P1）、60℃（P2）退火45?s，72℃延伸30?s，進行30個循環(huán)，最后72℃延伸10?min。

4.如權(quán)利要求2所述中國西門塔爾牛脂肪沉積性狀相關(guān)FDFT1基因SNPs的檢測方法，其特征在于：

SNP1（I4-130?T>C）為HaeIII內(nèi)切酶，在功能區(qū)域識別序列為GG/CC；SNP2（E8-500?C>T）為HpaII內(nèi)切酶，在功能區(qū)域識別序列為C/CGG。