[發(fā)明專利]一種絲腺蠶絲蛋白的提取方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410678658.8
• 申請(qǐng)日: 2014-11-24
• 公開（公告）號(hào): CN104447973A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張海萍;朱良均;楊明英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C07K1/14
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 林超

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種絲腺蠶絲蛋白的提取方法，屬于一種蠶絲蛋白的加工工藝。

背景技術(shù)

五齡熟蠶體內(nèi)具有一對(duì)肥大的絹絲腺，由前部絲腺、中部絲腺和后部絲腺組成。蠶體內(nèi)的蠶絲蛋白主要貯存于中部絲腺和后部絲腺中：中部絲腺是絲腺中最粗大的部分，用于分泌絲膠蛋白和貯藏從后部絲腺擠流過來的絲素蛋白；而后部絲腺是絹絲腺中最長(zhǎng)、折曲最多的部分，用于合成和分泌絲素蛋白。蠶絲蛋白（絲膠和絲素）在化妝品、食品、醫(yī)藥、工業(yè)農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域內(nèi)都有廣泛的應(yīng)用前景。現(xiàn)有的絲腺蠶絲蛋白的提取方法根據(jù)蠶絲蛋白組份分為中部絲腺蠶絲蛋白（絲膠絲素混合物）的提取、中部絲腺絲膠提取、中部絲腺絲素的提取和后部絲腺絲素的提取四大類。

中部絲腺蠶絲蛋白（絲膠絲素混合物）可通過將蠶體內(nèi)的絲腺體取出，用酸液浸泡脫水處理法獲得（CN200510021495.7）。

中部絲腺絲膠的提取可通過將五齡熟蠶解剖，取出中部絲腺，用去離子水（或蒸餾水或0.6%?NaCl等溶液）清洗干凈后，去除絲腺細(xì)胞膜，在常溫下用去離子水提取數(shù)次，提取液過濾后得到中部絲腺絲膠蛋白([J]?Insect?Biochemistry，1977，7(3):285-295；[J]絲綢，2005，1：22-24)；或者將五齡蠶中部絲腺加入水中進(jìn)行勻漿、離心、干燥等處理后得到中部絲腺絲膠蛋白（CN201310511239.0）；或者將五齡熟蠶解剖，取出中部絲腺，用蒸餾水洗凈后放在脫脂棉上風(fēng)干后，用蒸餾水潤(rùn)濕后剝?nèi)ソz腺細(xì)胞膜，再用刀片剝下中部絲腺絲膠層([J]?紡織學(xué)報(bào)，1992，13（12）:?17–20)。

中部絲腺絲素的提取可通過將五齡熟蠶解剖，取出中部絲腺，用去離子水等溶液將絲膠清洗去除后，得到中部絲腺絲素蛋白([J]?Acta?Biomaterialia，2009，5(7):?2579–2590；CN201310122956.4)。

后部絲腺絲素可通過將五齡熟蠶解剖，取出后部絲腺并剪成小段，再用細(xì)針將后部絲腺絲素?cái)D出，獲得后部絲腺絲素蛋白([J]?Journal?of?Wuhan?University?of?Technology-Mater?Sci?Ed，2011，26(2)：262-268)；或者將五齡蠶后部絲腺放入水相介質(zhì)中，0～4℃下振動(dòng)處理6～12h，過濾并凍干粉碎后獲得后部絲腺絲素粉末。

以上方法中解剖獲得的絲腺體為黏性狀態(tài)，不易操作；且不同組份絲腺蠶絲蛋白需要經(jīng)過不同處理進(jìn)行提取獲取，存在操作方法復(fù)雜、勞動(dòng)強(qiáng)度大、提取效率低等缺點(diǎn)。目前還沒有一種讓絲腺蠶絲蛋白直接在蠶體內(nèi)凝固后，解剖提取獲得不同組份絲腺蠶絲蛋白的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足，而提供一種絲腺蠶絲蛋白的提取方法，讓絲腺蠶絲蛋白直接在蠶體內(nèi)凝固后，解剖提取獲得不同組份絲腺蠶絲蛋白的方法。

本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案包括以下步驟：

1）將五齡熟蠶在水中浸死后，置于0～8℃溫度下放置處理，直至絲腺體凝固變硬后解剖取出，得到凝固的中部絲腺蠶絲蛋白原料和凝固的后部絲腺蠶絲蛋白原料；

2）將步驟1）得到的中部絲腺蠶絲蛋白原料用蒸餾水清洗，除去蠶體組織雜質(zhì)，獲得中部絲腺蠶絲蛋白（絲膠絲素混合物）；

將步驟1）中得到的后部絲腺蠶絲蛋白原料用蒸餾水清洗，得到的后部絲腺蠶絲蛋白為后部絲腺絲素；

3）將步驟2）得到的中部絲腺蠶絲蛋白中的外層蠶絲蛋白進(jìn)行剝離，外層剝離得到的蠶絲蛋白為中部絲腺絲膠，剝離剩余得到的內(nèi)部蠶絲蛋白為中部絲腺絲素。

所述的步驟2）制得的中部絲腺蠶絲蛋白（絲膠絲素混合物）用于加工制成溶液狀、粉末狀、膜狀、管狀、多孔支架狀或纖維狀的成品中部絲腺蠶絲蛋白（絲膠絲素混合物）。

所述的步驟3）制得的中部絲腺絲膠、中部絲腺絲素或者兩者混合物用于加工制成溶液狀、粉末狀、膜狀、管狀、多孔支架狀或纖維狀的成品中部絲腺絲膠、成品中部絲腺絲素或者成品中部絲腺絲膠和絲素的復(fù)合物，由此本發(fā)明制備而成的成品中部絲腺絲膠和/或中部絲腺絲素的適用面更廣。

所述的步驟3）制得的后部絲腺絲素用于加工制成溶液狀、粉末狀、膜狀、管狀、多孔支架狀或纖維狀的成品后部絲腺絲素，由此本發(fā)明制備而成的成品后部絲腺絲素的適用面更廣。

優(yōu)選地，所述步驟1）中的熟蠶放置溫度為4℃，其絲腺蠶絲蛋白凝固效果更好。