[發明專利]一種血鸚鵡EST微衛星標記的特異性引物及其應用

有效

• 申請號: 201410677213.8
• 申請日: 2014-11-24
• 公開（公告）號: CN104357574A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 劉肖蓮;付志茹;姜巨峰;吳會明;李春艷;夏蘇東;白曉慧;李景龍;張先光
• 申請（專利權）人: 天津市水產研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 韓奎勇

技術領域

本發明屬于分子生物學DNA分子標記技術領域，特別是一種涉及慈鯛科觀賞魚紫紅火口(紅頭麗體魚Viejasy?synspila?Hubbs?1935)與紅魔鬼(橘色雙冠麗魚Amphilophus?citrinellus?Günther?1864)雜交子代血鸚鵡EST(expressed?sequence?tags)微衛星標記的特異性引物及其應用。

背景技術

血鸚鵡，屬鱸形目，慈鯛科，原產于我國臺灣，是由母本紅頭麗體魚V.synspila與父本橘色雙冠麗魚A.citrinellus繁殖所得的屬間雜交魚種，具有良好的觀賞價值，自問世以來深受消費者青睞。

血鸚鵡屬淡水熱帶觀賞魚類，1986年在我國臺灣地區培育成功，因其具有中國人喜愛的火紅色外表，加上胖嘟嘟的身軀和柔軟鰭條以及擁有一副笑口常開的鸚鵡臉龐,群聚在一起既亮麗又喜氣，又稱紅財神、財神魚，且具有生長迅速、抗病能力強等特點，在觀賞魚市場中銷量很大。據統計，天津、北京、河北等地區的血鸚鵡商品魚每月的交易額在4000萬元以上，同時帶動相關的飼料、魚藥及運輸行業，其保守估計可達2000萬元以上，市場潛力巨大。隨著養殖規模的逐步擴大，血鸚鵡養殖過程中存在很多問題，如父母本產卵不穩定、尖頭率與黑頭率高、褪色率低，給養殖戶造成了較大的經濟損失。因此亟需對血鸚鵡及其親本進行種質資源調查，遺傳結構分析，重要經濟性狀的分子機制進行研究。微衛星分子標記，又稱簡單重復序列，由于其具有多態性高、共顯性遺傳、含量豐富、可重復性好等優點，目前已被廣泛應用于水生動物的群體遺傳結構分析、親緣關系鑒定、遺傳圖譜構建、性狀關聯分析等領域。

發明內容

本發明的目的是填補現有技術中血鸚鵡微衛星標記的空白，而提出一種血鸚鵡EST微衛星標記的特異性引物及其應用。

本發明解決其技術問題是采取以下技術方案實現的：

一種血鸚鵡EST微衛星標記的特異性引物，該特異性引物包括6對引物序列，分別命名為Vasc01、Vasc02、Vasc03、Vasc04、Vasc05及Vasc06，其中：

Vasc01：F：SEQ?ID?NO：1??R：SEQ?ID?NO：2

Vasc02：F：SEQ?ID?NO：3??R：SEQ?ID?NO：4

Vasc03：F：SEQ?ID?NO：5??R：SEQ?ID?NO：6

Vasc04：F：SEQ?ID?NO：7??R：SEQ?ID?NO：8

Vasc05：F：SEQ?ID?NO：9??R：SEQ?ID?NO：10

Vasc06：F：SEQ?ID?NO：11??R：SEQ?ID?NO：12。

上述血鸚鵡EST微衛星標記的特異性引物的應用，利用上述所得到的特異引物對血鸚鵡DNA進行擴增，檢測其多態性，選擇PIC>0.25引物對應的位點做為篩選出的血鸚鵡EST微衛星標記，將篩選出的血鸚鵡EST微衛星標記用于血鸚鵡種群的遺傳多樣性分析、遺傳結構檢測、種質資源調查、家系鑒定、遺傳圖譜構建、功能基因研究及血鸚鵡分子標記輔助育種。

而且，所述對血鸚鵡DNA進行擴增的PCR擴增反應體系為：10×buffer?2μL，dNTPs0.5μL，DMSO?0.5μL，5μM的正反引物分別0.5μL，Taq酶1U，50～100ng基因組DNA，加純水至總體積為20μL。

而且，所述檢測微衛星多態性是將血鸚鵡DNA樣本進行擴增后，產物利用ABI3730(Applied?Biosystems)基因分析儀的片段分析功能進行毛細管電泳，使用3730Data?collection和GeneMapper?v4.0軟件收集數據。

本發明的優點和積極效果是：

本發明利用生物信息學方法從血鸚鵡EST數據庫中其微衛星序列并設計保守引物，為利用血鸚鵡微衛星分子標記進行種質資源調查、群體遺傳結構分析、經濟性狀分子機制等研究奠定理論基礎。

附圖說明

圖1是UPGMA聚類樹的示意圖。

具體實施方式

以下對本發明實施做進一步詳述，以下實施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發明的保護范圍。

一種血鸚鵡EST微衛星標記的特異性引物，該特異性引物包括6對引物序列，分別命名為Vasc01、Vasc02、Vasc03、Vasc04、Vasc05、Vasc06，其中：

Vasc01：F：SEQ?ID?NO：1??R：SEQ?ID?NO：2