[發(fā)明專利]一種人脂肪間充質干細胞凍存液

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410676389.1
• 申請日: 2014-11-21
• 公開（公告）號: CN104472474A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發(fā)明（設計）人: 王一飛;陳海佳;葛嘯虎;麥錦連;王小燕;馬巖巖
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

技術領域

本發(fā)明涉及干細胞領域，具體涉及干細胞的凍存液，尤其是人脂肪間充質干細胞凍存液。

背景技術

干細胞是一類具有自我復制能力(self-renewing)的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞，醫(yī)學界稱為“萬用細胞”。根據干細胞所處的發(fā)育階段分為胚胎干細胞(embryonic?stem?cell，ES細胞)和成體干細胞(somatic?stem?cell)。根據干細胞的發(fā)育潛能分為三類：全能干細胞(totipotent?stem?cell，TSC)、多能干細胞(pluripotent?stem?cell)和單能干細胞(unipotent?stem?cell)(專能干細胞)。

脂肪間充質干細胞(Adipose?Mesenchymal?Stem?Cells,ADSC)是存在于脂肪組織的成體多潛能干細胞，在一定條件下可分化為骨、軟骨、心肌、平滑肌、神經及內皮等多種組織細胞。目前已發(fā)現間充質干細胞可以治療包括人體神經系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、運動系統(tǒng)等系統(tǒng)的80多種疾病，間充質干細胞在人體抗衰老方面的研究也已取得重大突破并已進行應用嘗試。有專家預測，間充質干細胞抗衰老技術的廣泛應用，將使人類的壽命在2050年普遍達到120歲以上。間充質干細胞作為重要的再生醫(yī)學資源在疾病治療和人體抗衰老的應用領域有非常重要的使用價值。

干細胞具有潛在的醫(yī)用價值以及應用價值，而細胞保存技術是實現這些潛在價值的基礎。干細胞儲存是指將干細胞從不同的人體組織中分離培養(yǎng)出來后，再經過檢測鑒定，然后將保存，以便于在臨床需要時可以將干細胞用于給病人回輸，達到治療疾病的目的。目前常用的細胞保存方法有培養(yǎng)和凍存兩種方式。其中培養(yǎng)保存，耗時耗力，程序繁瑣，在培養(yǎng)的過程中，特別是長期繼代培養(yǎng)時，細胞容易發(fā)生變異，細胞特性喪失，失去保存的價值。而細胞凍存即將細胞置于低溫環(huán)境下保存，以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)，保存其細胞特性，這樣保存的成本較低，可以在需要時將細胞復蘇培養(yǎng)，同時也避免了培養(yǎng)保存中因細胞污染而導致的細胞損失。

細胞凍存液(或稱為細胞冷凍保護劑)是細胞凍存時必須使用的一種溶液，它可以供給細胞生命代謝所必須的營養(yǎng)物質，同時可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。目前常用的細胞凍存液或市售的細胞凍存液中通常是由胎牛血清(fetal?bovine?serum,FBS)以及二甲基亞砜(dimathyl?sulfoxide,DMSO)等物質組成的。但胎牛血清屬于異源性物質，成分復雜，并存在引入污染和過敏原的風險，不適合于臨床應用。特別是在細胞治療中，異源性蛋白的存在，可能會引起不必要的，甚至是未知的不良反應，嚴重影響治療結果。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明目的在于針對現有技術存在的問題，提供一種臨床安全性高，同時又能很好保持凍存細胞活性的細胞凍存液，用于凍存人脂肪間充質干細胞。

為了實現本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術方案：

一種人脂肪間充質干細胞凍存液，由人血漿和二甲基亞砜組成。

在一些實施方案中，所述的人脂肪間充質干細胞凍存液中所述人血漿與二甲基亞砜的體積比為9:1。

進一步的，在一些優(yōu)選的實施方案中，所述的人脂肪間充質干細胞凍存液中所述人血漿為人自體血漿。

人自體血漿是指由脂肪間充質干細胞存儲者本人的靜脈血制備成的血漿。本發(fā)明采用人自體血漿與二甲基亞砜混合進行細胞凍存，一方面可以在一定程度上降低細胞凍存的成本，另一方面可以避免異源性物質的引入，具有更高的臨床安全性。

本發(fā)明還提供了一種凍存人脂肪間充質干細胞的方法，人脂肪間充質干細胞與上述人脂肪間充質干細胞凍存液混合后超低溫凍存。

在一些實施方案中，所述超低溫凍存為-80℃超低溫冰箱2～3d后轉移至液氮中保存。

在一些具體實施例中，分別采用常規(guī)的細胞凍存液(FBS+DMSO)和本發(fā)明所述人脂肪間充質干細胞凍存液凍存人脂肪間充質干細胞，一個月后進行細胞復蘇，檢測細胞活性和細胞狀態(tài)?？疾毂景l(fā)明所述人脂肪間充質干細胞凍存液對于人脂肪間充質干細胞的凍存性能的影響。結果顯示，與常規(guī)的細胞凍存液相比本發(fā)明所述人脂肪間充質干細胞凍存液，在細胞凍存過程中對細胞損傷作用較小，細胞活率較高。采用本發(fā)明所述人脂肪間充質干細胞凍存液凍存人脂肪間充質干細胞，復蘇后細胞生長形態(tài)更接近凍存前脂肪間充質干細胞的生長形態(tài)，復蘇后細胞數量更接近凍存前脂肪間充質干細胞的細胞數量，且對細胞表面標記物的表達沒有影響