[發(fā)明專利]抗人PD-L1/KIR雙特異性抗體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410674128.6
• 申請(qǐng)日: 2014-11-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105669862A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高宏海;張成海;趙杰;黨尉;鄧庭亭;何瑤玉;鄒秋玲;張波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海中信國(guó)健藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C12N15/13;C12N15/63;C12P21/02;A61K39/395;A61P35/00
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• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及雙特異性抗體及其制備方法和應(yīng)用，特別涉及能同時(shí)抗人PD-L1 (Programmeddeath-ligand1)和抗人KIR(killercellimmunoglobulin-like receptor)的雙特異性抗體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

癌癥是全球?qū)е滤劳龅闹饕蛑弧?012年全世界有1400萬(wàn)新增癌癥病 例，癌癥死亡人數(shù)達(dá)820萬(wàn)。中國(guó)新癌癥病例為307萬(wàn)，占全球總數(shù)的21.8％。 癌癥死亡人數(shù)約220萬(wàn)，占全球總數(shù)的21.8％。癌癥死亡人數(shù)約220萬(wàn)，占全 球癌癥死亡人數(shù)的26.9％。而且癌癥發(fā)病率在我國(guó)仍呈上升趨勢(shì)。

抗體藥物是以細(xì)胞工程技術(shù)和基因工程技術(shù)為主體的抗體工程技術(shù)制備的 藥物，具有特異性高，機(jī)制明確，療效顯著，毒副作用少等優(yōu)點(diǎn)。在各種疾病治 療、特別是對(duì)腫瘤治療有非常廣闊的前景。雙特異抗體(BispecificAntibody) 是含有兩個(gè)不同配體結(jié)合位點(diǎn)的免疫球蛋白分子，因此它可以同時(shí)結(jié)合兩個(gè)不同 的靶點(diǎn)，從而起到增加療效，減少用藥量及降低毒副作用。

PD-L1(B7-H1)屬于B7家族，具有IgV和IgC樣區(qū)、跨膜區(qū)及胞漿區(qū)尾部， PD-L1與其T細(xì)胞上的受體PD1相互作用，在免疫應(yīng)答的負(fù)性調(diào)控方面發(fā)揮著重 要作用(RileyJL.ImmunolRev.2009May；229(1):114-25.)。表達(dá)于腫瘤細(xì)胞 表面的Programmeddeath-ligand1(PD-L1)能與Programmeddeath1(PD-1) 結(jié)合從而抑制T細(xì)胞的激活，使其不能夠發(fā)現(xiàn)腫瘤和向免疫系統(tǒng)發(fā)出攻擊腫瘤 的信號(hào)。腫瘤細(xì)胞免疫逃逸是腫瘤不能被人體的免疫系統(tǒng)清除的重要原因之一。 研究發(fā)現(xiàn)，很多種腫瘤細(xì)胞系高表達(dá)PD-L1而且PD-L1的表達(dá)水平與腫瘤惡性程 度及術(shù)后復(fù)發(fā)率密切相關(guān)。抗PD-L1單抗能有效結(jié)合癌細(xì)胞表面的PD-L1并激活 T細(xì)胞，殺死腫瘤細(xì)胞。

KIR(killercellimmnoglobulin-likereceptor,KIR殺傷細(xì)胞免疫球蛋 白樣受體)表達(dá)于NK細(xì)胞(NaturalKillerCell，自然殺傷細(xì)胞)和部分T 細(xì)胞亞群表面(BensonDMJr,CaligiuriMA.CancerImmunolRes.2014 Feb；2(2):99-104)。KIR屬于Ig超家族成員，為I型膜蛋白，有膜外區(qū)、跨膜 區(qū)和胞質(zhì)區(qū)。KIR可以分為兩類：KIR2D和KIR3D。NK細(xì)胞表面的KIR,能識(shí)別 并結(jié)合自體細(xì)胞表面的MHCclassI分子(MajorHistocompatibilityComplexI, I型組織相容性復(fù)合物)，傳遞抑制性信號(hào)至胞內(nèi)從而阻止NK細(xì)胞激活，防止對(duì) 正常表達(dá)MHCclassI分子的細(xì)胞的殺傷。腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞表面MHC classI分子缺失或只有極少量讓NK細(xì)胞能識(shí)別并殺死它們。一些腫瘤細(xì)胞會(huì) 異常表達(dá)非經(jīng)典的MHCclassI分子,如HLA-E(HumanLeucocyteAntigen-E， 人白細(xì)胞抗原-E),HLA-G(HumanLeucocyteAntigen-G，人白細(xì)胞抗原-G).它們 能與NK細(xì)胞表面KIR結(jié)合，啟動(dòng)抑制性信號(hào),從而逃避NK細(xì)胞的攻擊。抗KIR 單抗能有效結(jié)合NK細(xì)胞表面KIR,激活NK細(xì)胞。

PDL1及KIR是腫瘤免疫逃逸的兩個(gè)機(jī)理。抗PD-L1和KIR雙特異性抗體同 時(shí)阻斷這兩個(gè)腫瘤免疫逃逸的方式。同時(shí)激活T細(xì)胞及NK細(xì)胞的殺傷腫瘤細(xì)胞 的功能。另外PDL1過(guò)表達(dá)于許多腫瘤細(xì)胞表面，使該雙特異性抗體更特異地靶 向于腫瘤細(xì)胞。本發(fā)明將識(shí)別PD-L1和識(shí)別KIR的抗體片段構(gòu)建在同一抗體分 子中，其抑制腫瘤的效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用抗PD-L1或抗KIR抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種抗PD-L1/KIR的雙特異性抗體及其制備方法和應(yīng) 用，本發(fā)明運(yùn)用基因工程等技術(shù)手段，將識(shí)別PD-L1和識(shí)別KIR的抗體片段構(gòu)建 在同一抗體分子中從而制得能同時(shí)抗PD-L1/KIR的雙特異性抗體，該雙特異性抗 體能同時(shí)阻斷兩種腫瘤免疫逃逸的方式，并同時(shí)激活T細(xì)胞及NK細(xì)胞的殺傷腫 瘤細(xì)胞的功能，其抑制腫瘤的效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用抗PDL1或抗KIR抗體。