[發(fā)明專利]一種以α-螺旋5為靶標的抑制HPV L1五聚體形成的抑制劑有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410672160.0 | 申請日： | 2014-11-22 |
| 公開（公告）號： | CN104761623B | 公開（公告）日： | 2019-11-29 |
| 發(fā)明（設計）人： | 吳玉清;潘東;金石;付丁伊;劉永江;陳小江;許錚;伍樹明;銀飛 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京康樂衛(wèi)士生物技術(shù)股份有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/025 | 分類號： | C07K14/025;C07K7/08;C12N15/37;C12N15/70;A61K39/12;A61K38/10;A61P31/20 |
| 代理公司： | 11551 北京鼎承知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人： | 李偉波;孟奎<國際申請>=<國際公布>= |
| 地址： | 100176 北京市大興區(qū)北京經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)榮昌東*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 螺旋 靶標 抑制 hpv l1 體形 抑制劑 | ||
本發(fā)明公開了一種以α?螺旋5為靶標的抑制人乳頭瘤病毒L1五聚體形成的抑制劑，是以人乳頭瘤病毒L1蛋白C末端α?螺旋5為結(jié)構(gòu)基礎制備的靶向性小肽藥物，屬于生物制藥技術(shù)領域。
技術(shù)領域：
本發(fā)明公開了一種以α-螺旋5為靶標的抑制人乳頭瘤病毒L1五聚體形成的抑制劑，是以人乳頭瘤病毒L1蛋白C末端α-螺旋5為結(jié)構(gòu)基礎制備的靶向性小肽藥物，屬于生物制藥技術(shù)領域。
背景技術(shù)：
人乳頭瘤病毒（human papillomavirus簡稱：HPV）屬于乳頭狀瘤病毒科，為小型的、非包膜的雙鏈DNA病毒[1]。HPV主要侵染人體器官的表皮組織（如皮膚、口、咽喉、食道、生殖器等部位），可引起鱗狀上皮增生，高致病亞型可引發(fā)惡性腫瘤，并可引起女性宮頸癌的發(fā)生[2]。目前，大約有100多種亞型的HPV已經(jīng)通過鑒定，其中有15種亞型別可感染生殖系統(tǒng)并致癌，被認為是高風險型別（如HPV 16、18、33和58亞型等），它們是誘發(fā)宮頸癌、直腸癌以及其它生殖系統(tǒng)癌癥的主要原因[3,4]。盡管感染HPV的潛在危害十分巨大，但目前的研究已表明該過程以及其誘發(fā)的相關疾病可以通過預防性疫苗進行預防。現(xiàn)今已開發(fā)并上市的HPV L1類病毒顆粒（VLP）疫苗有兩種，包括Cervarix（針對HPV 16/18的二價疫苗）以及Gardasil（針對HPV 16/18/6/11的四價疫苗）[5]。但是，這些上市的預防性疫苗不僅具有免疫上的亞型別嚴格限制性，而且穩(wěn)定性差、造價高，嚴重阻礙了其在宮頸癌高發(fā)的發(fā)展中國家的推廣使用[6]；研發(fā)第二代疫苗的研發(fā)勢在必行。為了解決第一代疫苗的缺陷并為第二代疫苗的研發(fā)提供理論基礎，對HPV主要衣殼蛋白L1結(jié)構(gòu)與功能的研究越發(fā)顯得至關重要。
HPV病毒粒子的外殼由主要衣殼蛋白L1和次要衣殼蛋白L2組成。無論是原核還是真核表達系統(tǒng)表達的L1在近生理環(huán)境中均可自發(fā)地形成穩(wěn)定的五聚體，并經(jīng)進一步自組裝后形成二十面體結(jié)構(gòu)的類病毒粒子（VLPs）。VLPs形態(tài)與免疫原性均與天然的病毒顆粒相似[7]，因此其生理活性與構(gòu)筑單元的高級結(jié)構(gòu)密不可分。為了進一步研究L1結(jié)構(gòu)與功能的關系，我們利用定點突變的方法對保守氨基酸位點進行誘變，以觀察突變體結(jié)構(gòu)與生理行為的特征關系以及突變體與野生型L1在結(jié)構(gòu)和功能上的差別。
在已報道的文獻中，對乳突狀瘤病毒主要衣殼蛋白L1結(jié)構(gòu)功能學的研究主要集中在五聚體之間而非單體之間各亞基相互作用的界面區(qū)域[8-10]，如Conway等將HPV 16亞型L1中高度保守的半胱氨酸——C175、C185、C428分別突變成絲氨酸S后，由于破壞了五聚體之間的二硫鍵而導致病毒的滴度下降、并致使病毒粒子的穩(wěn)定性低于野生型[8]；同樣SAPP等[9]對HPV-33亞型L1的 C176、C427任意單點進行絲氨酸突變，同樣由于破壞了分子間二硫鍵而阻止了VLPs的形成；而Wolf等[10]對BPV亞基之間相互作用的研究發(fā)現(xiàn)，L1 C-末端區(qū)域形成的“手臂”結(jié)構(gòu)是五聚體之間亞基相互作用的重要因素。
發(fā)明內(nèi)容：
本發(fā)明提供了一種以α-螺旋5為靶標的抑制HPV L1五聚體形成的抑制劑，是以人乳頭瘤病毒 L1蛋白C末端α-螺旋5為結(jié)構(gòu)基礎制備的靶向性小肽藥物。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下：
通過對HPV 16、18型別主要衣殼蛋白L1 C-末端α-螺旋5（h5）上的高度保守氨基酸序列（h5中FPL*G*R*KFLLQAG）中的亮氨酸L*、甘氨酸G*、精氨酸R*位點依次進行單氨基酸位點突變成丙氨酸A、丙氨酸A、丙氨酸A/組氨酸H，破壞了L1蛋白五聚體的形成，獲得了其突變體L1的單體蛋白，并對HPV衣殼蛋白的結(jié)構(gòu)機理進行研究。
本發(fā)明公開的一種人乳頭瘤病毒L1 蛋白的突變體，其特征在于：HPV L1蛋白C末端α-螺旋5中PL*GRKFL中的亮氨酸L*突變成丙氨酸（Ala，A）；
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