[發(fā)明專利]一種簡便的DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410668127.0
• 申請日: 2014-11-20
• 公開（公告）號: CN105602973B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱志剛;李君文;丁誠實(shí);金敏;諶志強(qiáng);楊棟;王新為
• 申請（專利權(quán)）人: 軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院環(huán)境醫(yī)學(xué)與作業(yè)醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種簡便的DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)方法，其特征是包括以下步驟：

(1)挑取新活化的細(xì)菌單克隆，接種到10ml Luria-Bertani培養(yǎng)基，在37℃、210rpm條件下振蕩培養(yǎng)至OD₆₀₀約為1；

(2)將(1)中的菌體按1％接種到10ml Luria-Bertani培養(yǎng)基，在37℃、210rpm條件下振蕩培養(yǎng)12h；

(3)用Luria-Bertani培養(yǎng)基將(2)中的菌體稀釋100倍，取1.5ml菌體稀釋液置于滅菌的1.5ml離心管中，在室溫下離心棄上清收集細(xì)菌后用100μl滅菌生理鹽水重懸細(xì)胞，離心參數(shù)為5000×10min；

(4)向1.5ml離心管中加入濃度為50mmol/L的納米氧化鋁顆粒懸液20μl和100ng質(zhì)粒DNA，37℃作用40min后，在室溫下離心棄上清去除未結(jié)合的DNA，滅菌超純水離心洗滌2次，離心參數(shù)為15000×15min；其中所述的納米氧化鋁顆粒＜50nm；

(5)加入(3)中重懸的細(xì)胞液90μl，室溫作用一定時間，渦輪震蕩2min，加入900μlLuria-Bertani培養(yǎng)基，在37℃、210rpm條件下振蕩復(fù)蘇1h；

(6)菌液涂布在含有相應(yīng)抗生素的選擇性平板上，37℃培養(yǎng)，生長的菌落即為轉(zhuǎn)導(dǎo)成功的克隆。