[發明專利]一種作物脂肪氧化酶同工酶LOX-3比活力的定量測定方法在審
| 申請號： | 201410668086.5 | 申請日： | 2014-11-20 |
| 公開（公告）號： | CN104390919A | 公開（公告）日： | 2015-03-04 |
| 發明（設計）人： | 張瑛;滕斌;吳敬德;宣紅;周俊峰 | 申請（專利權）人： | 安徽省農業科學院水稻研究所 |
| 主分類號： | G01N21/31 | 分類號： | G01N21/31 |
| 代理公司： | 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112 | 代理人： | 余成俊 |
| 地址： | 230031 *** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 作物 脂肪 氧化酶 lox 活力 定量 測定 方法 | ||
1.一種作物脂肪氧化酶同工酶LOX-3比活力的定量測定方法，其特征在于，包括以下步驟：
?（1）將作物胚胎磨碎，加入提取液，研磨成勻漿,將勻漿裝入超聲波萃取釜中，將超聲波發射頻率設定在30-40KHz，溫度調節控制在20-25℃，萃取時間5-8分鐘，然后轉至具蓋離心管，再用提取液分3-4次洗滌，洗滌液轉至具蓋離心管，脫色搖床振蕩8-10min，8000?rpm離心8-10min，靜置3-5?min，取上層清液，即酶液；
?（2）取提取的酶液于比色皿中，加入適量的反應液，在454nm處測定吸光值，反應開始時記錄吸光值，取出反應體系，至離心管，4℃避光反應，測定24h后的吸光值并記錄，以吸光值的變化表示LOX-3活力，用純水作為參比調零，以緩沖液代替酶液作為對照；
（3）測定酶液蛋白濃度：
取適量酶液，先測定樣品280nm?OD?值和260nm?OD?值，再按照以下公式計算酶液蛋白濃度：?
酶液蛋白濃度（mg/mL）=280nm?OD?值*1.45-0.74*260nm?OD?值；
?（4）計算酶比活力：
按照酶比活力測定公式計算出酶比活力，
酶比活力=（樣品0小時的OD值-樣品24小時的OD值）-（對照0小時的OD值-對照24小時的OD值）/酶液蛋白濃度。
2.根據權利要求1所述的作物脂肪氧化酶同工酶LOX-3比活力的定量測定方法，其特征在于：所述的作物為水稻或花生。
3.根據權利要求1所述的作物脂肪氧化酶同工酶LOX-3比活力的定量測定方法，其特征在于：所述的提取液的配制方法為：取甘油10ml，Tween-20?1.5ml，用PH6.6的磷酸緩沖液定容至100ml，經磁力攪拌器攪拌均勻，得LOX3提取液；
所述的pH6.6磷酸緩沖液的制備：Na2HPO4?71.64g/L，NaH2PO4?31.21g/L，取26.865g?Na2HPO4?，19.506?g?NaH2PO4，加水溶解，定容至1000ml即可。
4.根據權利要求1所述的作物脂肪氧化酶同工酶LOX-3比活力的定量測定方法，其特征在于：所述的反應液的制備方法為：將PH6.6的磷酸緩沖液、純水、亞油酸鈉和稀釋1.5倍的飽和?-胡蘿卜素-丙酮溶液，按5:1:1:1（v/v）的比例混合，得LOX-3反應液，所述的亞油酸鈉的配制方法：定量稱取70mg亞油酸，再加入等量Tween-20，再加入4ml無氧水，充分混勻，在加入0.5N的NaOH約0.55ml至溶液變澄清，再定容至25ml，等量，分裝至-20℃冷藏，待用；所述的釋1.5倍的飽和?-胡蘿卜素-丙酮溶液的配制：先配飽和的?-胡蘿卜素-丙酮溶液，再用丙酮稀釋1.5倍，即可，現配現用。
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