[發明專利]γ-聚谷氨酸的發酵制備方法及產γ-聚谷氨酸的菌株

有效

• 申請號: 201410664277.4
• 申請日: 2014-11-20
• 公開（公告）號: CN104694590A
• 公開（公告）日: 2015-06-10
• 發明（設計）人: 周驊;徐佳;陳維;齊宗獻;方平艷
• 申請（專利權）人: 武漢慧寶康源醫學研究有限責任公司
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C12N13/00;C12N15/01;C12R1/125
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.γ-聚谷氨酸的發酵方法或者提高γ-聚谷氨酸發酵產量的方法，其包括：

（1）將產γ-聚谷氨酸的枯草芽孢桿菌（如，HBY-PBS-ZY55）接種入添加了正己烷、吐溫-80和/或甜菜堿的發酵培養基中進行發酵培養；

（2）任選在步驟（1）的發酵培養期間進一步添加正己烷；

（3）收集發酵培養物中的γ-聚谷氨酸。

2.權利要求1所述的方法，其中，正己烷的添加量為5-50ml/L，優選為8-30ml/L，更優選為10-20ml/L；吐溫-80的添加量為0.1-1ml/L，優選為0.2-0.8ml/L，更優選為0.45-0.55ml/L；和/或，甜菜堿的添加量為0.05-0.5?g/L，優選為0.1-0.3?g/L，更優選為0.15-0.25?g/L。

3.權利要求1所述的方法，其中，發酵培養是短期的，優選發酵培養的時間不超過36小時，更優選為26-36小時，如26-28小時或32-36小時。

4.權利要求1所述的方法，其中，步驟（1）中的產γ-聚谷氨酸的枯草芽孢桿菌是在種子培養基中活化培養而獲得的。

5.獲得高產（優選是短期發酵高產）γ-聚谷氨酸的枯草芽孢桿菌的方法，其包括：

（1）將待誘變的產γ-聚谷氨酸的枯草芽孢桿菌液體培養（優選培養至OD₆₀₀為10-12），然后稀釋（優選稀釋10⁶倍）；

（2）將步驟（1）獲得的稀釋菌液在黑暗條件下進行紫外照射（優選在30W紫外燈下30cm處照射180秒）；

（3）將步驟（2）獲得的經照射的菌液在平板篩選培養基上避光培養；

（4）將步驟（3）培養獲得的單菌落分別進行發酵培養（優選短期發酵）；

（5）測量步驟（4）發酵產生的γ-聚谷氨酸的產量，選擇出高產（優選是短期發酵高產）γ-聚谷氨酸的枯草芽孢桿菌。

6.權利要求5所述的方法獲得的高產（優選是短期發酵高產）γ-聚谷氨酸的枯草芽孢桿菌，優選其是于2014年5月20日以保藏編號CCTCC?NO.?M2014213保藏于中國典型培養物保藏中心（CCTCC）的枯草芽孢桿菌(Bacillus?Subtillis)?HBY-PBS-ZY55。

7.權利要求6所述的枯草芽孢桿菌在γ-聚谷氨酸的發酵（優選是短期發酵）中的應用。

8.權利要求7所述的應用，其中，γ-聚谷氨酸的發酵的方法包括在發酵中維持溶氧量≥10%和/或維持糖（如，葡萄糖）含量為10-15g/L。

9.權利要求7所述的應用，其中γ-聚谷氨酸的發酵的方法是權利要求1-4任一所述的方法。

10.說明書（尤其是實施例）中記載的方法或培養基。