[發明專利]一種基于LAMP方法快速檢測肉類摻假的試劑盒

有效

• 申請號: 201410660271.X
• 申請日: 2014-11-18
• 公開（公告）號: CN104404145A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 唐小春;盧新;冉光耀;謝俊平;逄大欣;梁科;任林柱;歐陽紅生
• 申請（專利權）人: 廣州綠洲生化科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

1.一種用于肉類檢測的LAMP試劑盒，包括反應緩沖液、DNA聚合酶和特異性引物，其特征在于：特異性引物序列如下：

豬肉檢測特異性序列：

P-F3：5’-CCTCACCCTAGTAGAACGAA-3’

P-B3：5’-GCTTGACATGGCTAGCAT-3’

P-FIP：5’-GGTGAATAGTTTTAGGGCATCGGCTTTTACTACGAAAAGGACCCAACG-3’

P-BIP：5’-TTGCACCAATCCTAGCCTTATCCCTTTTGGGTAGGGTATTGGTAGTGGA-3’

狐貍肉檢測特異性序列：

F-F3：5’-TCTGAGGGGCAACCGTAAT-3’

F-B3：5’-GTCGGATGTGATTCCTGAAGG-3’

F-FIP：5’-CTTTGTCTACTGAGAAGCCCCCTCA-CTGCTATCCCCTATATCGGAACC-3’

F-BIP：5’-CCATTCATCATCGCAGCATTAGCG-GTTGTTGGATCCTGTTTCGTGG-3’

老鼠肉檢測特異性序列：

M-F3:?5’-CTCTATTTCTACCATCCTCCG-3’

M-B3:?5’-GATTAGACCCGTTACCATCG-3’

M-FIP:?5’-TTCAGTATAGTCACCCCCAGGACTTTTTGAAATCAACAACCCGCC-3’

M-BIP:?5’-ACCAGGCATCTGGTTCTTACTTTTTAAGGGGAACGTATGGACG-3’

雞肉檢測特異性序列：

C-F3:?5’-CTCACGAGAGATCAGCAACC-3’

C-B3:?5’-GAAGAGAGAAGATGCCGCG-3’

C-FIP:?5’-GTACGGTGGAAGGCAAGTAGGGTTTTGTACTTCATGACCAGTCTCAGG-3’

C-BIP:?5’-GGCACATCCCATGCATAACTCCTTTTTATCACGGACTAAAGAGGGGA-3’

鴨肉檢測特異性序列：

D-F3:?5’-GATTCTACTTCACCGCCCTA-3’

D-B3:?5’-AATCCGAAGTGGTGGTCTG-3’

D-FIP:?5’-CCGGTGGCAACAAAGAAAGTGGTTTTTAGAGTACCATGAAGCCCCA-3’

D-BIP:?5’-CCACGGACTCCACGTGATCATCTTTTTTGATTAGTCGGAGGAGGCA-3’。

2.根據權利要求1所述的LAMP試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還含有DNA提取液。

3.根據權利要求1或2所述的LAMP試劑盒，其特征在于：所述試劑盒用于肉類檢測的反應體系為：1×ThermoPol?反應緩沖液，MgSO₄，dNTPs，Betaine，Calcein,?MnCl₂，?Bst?DNA聚合酶，外引物，內引物，模板DNA和滅菌ddH₂O。

4.根據權利要求3所述的用于肉類檢測的反應體系為，其特征在于：反應體系中各組分的濃度為MgSO₄1-10?mM，?dNTPs0.1-5?mM，?Betain0.1-1?M，?Calcein?10-50?μM,?MnCl₂0.1-5?mM，1-40U?Bst?DNA聚合酶，0.1-2?μl外引物，1-10?μl內引物、0.1-5μl模板DNA，補足滅菌ddH₂O至25μl；引物的濃度為1-20?μmol/L，模板DNA的濃度為10-100ng/μl。