[發明專利]一種繡球菌堿溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的應用

在審

• 申請號: 201410659420.0
• 申請日: 2014-11-07
• 公開（公告）號: CN104448014A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 張麗霞;武燕;卞立紅;張志國;蘭天麗
• 申請（專利權）人: 大慶師范學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P39/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物化學領域，特別涉及一種繡球菌堿溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的應用。

背景技術

繡球菌(Sparassis?crispa?Fr.)，屬無隔擔子菌亞綱、無褶菌目、繡球菌科、繡球菌屬，其子實體肉質潔白細嫩，鮮美可口，營養豐富，是一種非常珍稀名貴的食、藥用菌。多糖是繡球菌重要的活性成分，具有免疫調節、抗腫瘤、降血糖、降血脂等藥理活性，對于繡球菌堿溶多糖抗衰老活性的研究卻很少見。

發明內容

為了解決現有技術的問題，本發明實施例提供了一種繡球菌堿溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的應用。所述技術方案如下：

一方面，提供了一種繡球菌堿溶多糖的提取方法，所述方法包括以下步驟：

(1)堿溶粗多糖提取

將繡球菌子實體粉末經加水溶脹過夜、水浴提取3次每次2h后離心，所得殘渣經細胞破碎儀破壁10min、0.1mol/mL氫氧化鈉提取3次每次2h后再次離心，合并上清液，用0.1mol/mL鹽酸中和后濃縮至10mL，將濃縮液用3倍體積無水乙醇進行醇沉過夜離心，向沉淀中添加無水乙醇、乙醚進行洗滌，待離心后將沉淀進行干燥，即得堿溶粗多糖。

(2)堿溶粗多糖純化

精確稱量堿溶粗多糖，用蒸餾水配制成5％糖液，加入10％三氯乙酸調節其pH值至3，靜置過夜，以5000r/min離心10min，在上清液中加入4倍體積的95％乙醇再靜置過夜，離心，向沉淀中添加無水乙醇、乙醚洗滌，洗滌過后于真空干燥器中干燥，即得去蛋白堿溶多糖。

另一方面，提供了一種繡球菌堿溶多糖抗衰老活性的應用，所述應用為繡球菌堿溶多糖對果蠅壽命的影響，具體方法包括：將成熟果蠅裝入含有基礎培養基的50mL三角瓶內交配產卵，形成蛹時除去親本蠅，收取10h內羽化的果蠅，用乙醚將其麻醉后，分出雌雄，挑取體型大小相近的果蠅進行分組；將選取好的雌雄果蠅平均置入基本培養瓶和含有質量濃度為0.2～5.0g/L的繡球菌堿溶多糖的培養瓶中，每個培養瓶放入15只果蠅，雌雄分瓶培養，以基本培養瓶為空白對照組，以多糖組為試驗組；多糖組的果蠅在基礎培養基中培養到第14天后，轉到含不同濃度多糖提取物的培養基中培養直至其全部死亡，其中每隔4d更換新鮮的培養基。

所述培養瓶中繡球菌堿溶多糖的質量濃度為0.2g/L。

有益效果：本發明不同濃度的繡球菌堿溶粗多糖與去蛋白堿溶多糖對果蠅的壽命均有延長作用，具有抗衰老的作用，而且對雄果蠅壽命延長的效果高于雌性。

具體實施方式

實施例

一、繡球菌堿溶多糖的提取方法

所述方法包括以下步驟：

(1)堿溶粗多糖提取

將繡球菌子實體粉末經加水溶脹過夜、水浴提取3次每次2h后離心，所得殘渣經細胞破碎儀破壁10min、0.1mol/mL氫氧化鈉提取3次每次2h后再次離心，合并上清液，用0.1mol/mL鹽酸中和后濃縮至10mL，將濃縮液用3倍體積無水乙醇進行醇沉過夜離心，繼續向沉淀中添加無水乙醇、乙醚進行洗滌，待離心后將沉淀進行干燥，即得；

(2)堿溶粗多糖純化

精確稱量堿溶粗多糖，用蒸餾水配制成5％糖液，加入10％三氯乙酸調節其pH值至3，靜置過夜，以5000r/min離心10min，在上清液中加入4倍體積的95％乙醇再靜置過夜，離心，向沉淀中添加無水乙醇、乙醚洗滌，洗滌過后于真空干燥器中干燥，即得去蛋白堿溶多糖。

二、多糖含量測定-苯酚-硫酸法

多糖含量的測定方法：精確稱量水溶、堿溶和酸溶多糖5μg，分別定容至50mL容量瓶中備用。各取1mL于相應的試管中，采用苯酚-硫酸法，在490nm波長處測定吸光度，用回歸方程計算出樣品中多糖含量和得率，計算方法如下：

多糖得率＝粗多糖含量/原料重量×100％

本實施例中精確稱取10g繡球菌粉末，采用堿提法提取繡球菌堿溶多糖。通過三氯乙酸法脫蛋白后，得到去蛋白堿溶多糖。根據苯酚-硫酸法，得葡萄糖回歸方程為：A＝0.0094C+0.019(R²＝0.9975)。計算多糖含量和得率見表1。由表1可以得知，繡球菌堿溶多糖含量隨著三氯乙酸法脫蛋白后有所增加，而多糖得率卻減少。

表1繡球菌堿溶多糖含量與得率的測定

三、繡球菌堿溶多糖的抗衰老活性的應用

(1)果蠅培養基的配置