[發明專利]一種鰒發光桿菌熒光素酶、編碼該酶的基因及其應用在審
| 申請號： | 201410657326.1 | 申請日： | 2014-11-17 |
| 公開（公告）號： | CN104845986A | 公開（公告）日： | 2015-08-19 |
| 發明（設計）人： | 王靜雪;林洪;玄冠華 | 申請（專利權）人： | 中國海洋大學 |
| 主分類號： | C12N15/53 | 分類號： | C12N15/53;C12N9/02;C12N15/63;C12N1/21;C12Q1/66;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109 | 代理人： | 尉偉敏;侯蘭玉 |
| 地址： | 266100 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 發光 桿菌 熒光 編碼 基因 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種鰒發光桿菌熒光素酶基因，其具有如SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列。
2.含有權利要求1所述基因的重組表達載體。
3.含有權利要求2所述重組表達載體的微生物。
4.一種鰒發光桿菌熒光素酶，其具有如SEQ?ID?No.2所示的氨基酸序列。
5.權利要求4所述鰒發光桿菌熒光素酶在NADH的定量檢測方面的應用。
6.一種利用權利要求1所述鰒發光桿菌熒光素酶基因進行NADH定量檢測的方法，其特征是該方法包括如下步驟：
（1）采用分子克隆技術將權利要求1所述基因導入到大腸桿菌RosettaDE3中，誘導表達熒光素酶；
（2）驗證FMN：NADH氧化還原酶存在于大腸桿菌RosettaDE3中；
（3）重組大腸桿菌粗酶液制備：提取重組大腸桿菌RosettaDE3胞內產物，得到粗酶制劑，采用該粗酶制劑進行NADH的定量檢測。
7.根據權利要求6所述的定量檢測方法，其特征在于：定量檢測中采用微弱發光測量儀在450-490nm下測量體系的發光值。
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