[發明專利]一種抗腫瘤小分子多肽及應用

有效

• 申請號: 201410654935.1
• 申請日: 2014-11-17
• 公開（公告）號: CN104356204B
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發明（設計）人: 陳小佳;洪岸
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K38/08;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司44245
• 代理人: 蘇運貞,陳燕嫻

技術領域

本發明屬于生物技術和醫藥領域，特別涉及一種抗腫瘤小分子多肽及應用。

背景技術

FGFRs(成纖維細胞生長因子受體)在多種腫瘤組織中表達異常：FGFRs的突變和異常擴增在婦科腫瘤特別是乳腺癌的發生發展中起了重要的作用。如在乳腺癌中發現了FGFR1和FGFR2的過度擴增，在膀胱癌中發現FGFR3突變，在多發性骨髓瘤中發現FGFR3的易位，胰腺癌病人癌細胞中FGFR2表達量高的存活期明顯短于表達量低的病人，在胃癌、肺癌、卵巢癌、子宮內膜癌中均有FGFR2的基因突變、過表達或者表達異常；另外，在FGFR2在基因表達的剪切過程中由原來Ⅲb亞型轉變為Ⅲc亞型后，往往伴隨著腫瘤惡性化增加的表現形式，包括乳腺癌、前列腺癌、胃癌、食管癌、子宮內膜癌等，而阻斷FGFRs磷酸化介導的信號通路可抑制腫瘤的生長及腫瘤細胞的增殖等作用。

目前，已有蛋白類藥物通過阻斷FGFRs信號通路達到治療腫瘤疾病的效果，如Cetuximab(西妥昔單抗)、panitumumab(帕尼單抗)等抗體。蛋白藥物可較好的阻斷FGFRs的信號傳遞，但是蛋白類藥物由于分子量較大，注射到人體一般會有免疫原性。因此，多肽類藥物具有分子量小，在人體內不結存，無副作用，免疫原性小，活性好等優點成為一個研究的熱點。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種抗腫瘤小分子多肽。

本發明的另一目的在于提供所述的抗腫瘤小分子多肽的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種抗腫瘤小分子多肽，氨基酸序列如下所示：LQLQAEER；

所述的抗腫瘤小分子多肽在制備抗腫瘤藥物中的應用；

所述的腫瘤優選為具有FGFRs表達生長依賴性的腫瘤細胞和/或腫瘤組織，特別是具有FGFR2表達生長依賴性的腫瘤細胞和/或腫瘤組織，比如目前有文獻報道和本發明實施例證實FGFR2生長依賴的乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、食管癌和胃癌等。

本發明相對于現有技術具有如下的優點及效果：本發明提供的抗腫瘤小分子多肽能特異性結合FGFR2，阻斷FGFRs信號通路，達到抗腫瘤的效果。

附圖說明

圖1是P5肽對MCF-7細胞作用的結果圖。

圖2是P5肽對各細胞株的抑制效果圖，其中：圖A為P5肽對DU145細胞株的抑制效果圖，圖B為P5肽對SGC7901細胞株的抑制效果圖，圖C為P5肽對KYSE510細胞株的抑制效果圖，圖D為P5肽對KYSE30細胞株的抑制效果圖。

圖3是FGF2上P5肽同源序列在FGFR2中結合位置的模擬結構圖。

圖4是P5及其衍生肽對DU145細胞的抑制作用結果圖；其中，圖A為P5DU145細胞的抑制作用結果圖，圖B為P5-1對DU145細胞的抑制作用結果圖，圖C為P5-2對DU145細胞的抑制作用結果圖，圖D為P5-3對DU145細胞的抑制作用結果圖。

圖5是P5及突變多肽P5-3與FGFR2結合能力檢測結果圖；其中，圖Aa為用FGFR2抗體檢測FGFR2蛋白的結果圖，圖Ab為用10μg/ml生物素標記的P5檢測FGFR2蛋白的結果圖，圖Ac為用10μM生物素標記的檢測FGFR2蛋白的結果圖，泳道1為細胞裂解物，泳道2為FGFR2蛋白；圖B為ELISA法檢測P5肽及P5-3肽與FGFR2蛋白結合的結果圖。

圖6是檢測加入P5后FGFR2相關信號因子變化的Western Blot圖。

具體實施方式

下面結合實施例及附圖對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。

本發明首先采用生物信息學的方法，依照FGF2-FGFR2蛋白結合模式，以FGF2-FGFR2相互作用位點為基礎，采用Accerly公司的蛋白模擬軟件Discovery Studio2.5/3.5對FGF2及其特異性結合受體FGFR2IIIc的結合進行分析，設計小分子多肽，其中每條多肽中都含有FGF2上1至3個與FGFR2作用的關鍵氨基酸，并且要求多肽長度是剛好落在FGFR2蛋白的活性口袋中，希望這幾條多肽(如表1所示)能阻斷FGF2與FGFR2的結合，從而發揮抗腫瘤的功能。

其次，采用MTT法表達并依賴FGFR2生長的腫瘤細胞株進行篩選，從候選的若干條短肽中發現其中一條P5肽能顯著抑制腫瘤細胞的生長，并通過克隆形成實驗進一步證實了P5肽的抑瘤效果。