[發明專利]抗人胃癌相關蛋白GCRG213的單克隆抗體

在審

• 申請號: 201410652952.1
• 申請日: 2014-11-17
• 公開（公告）號: CN104479014A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 吳本儼;伍銀橋;王剛石
• 申請（專利權）人: 吳本儼;伍銀橋;王剛石
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種抗人胃癌相關蛋白GCRG213的單克隆抗體。

背景技術

蛋白GCRG213是應用熒光標記的mRNA差異顯示技術，從我國人胃竇部進展期腺癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織中篩選并克隆的1條胃癌高表達的mRNA翻譯產生的。蛋白GCRG213的氨基酸序列如序列表序列1所示，編碼該蛋白的全長cDNA如序列表序列2所示，序列表序列2的第13位至第438位為開放閱讀框架。由于蛋白GCRG213的表達與胃癌顯著相關，GCRG213蛋白表達的檢測對胃癌的診斷和研究分析具有重要意義。目前，還沒有商業化的針對蛋白GCRG213的單克隆抗體、雜交瘤細胞株和相關試劑。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗人胃癌相關蛋白GCRG213的單克隆抗體。

本發明提供的抗人GCRG213蛋白的單克隆抗體，由保藏號為CGMCC?No.7602的雜交瘤細胞株產生的；所述人GCRG213蛋白為序列表序列1所示蛋白。

本發明另一個目的是提供一株分泌抗人GCRG213蛋白的單克隆抗體的的雜交瘤細胞株GCRG213。

本發明提供的分泌抗人GCRG213蛋白的單克隆抗體的的雜交瘤細胞株GCRG213，其保藏號為CGMCC?No.7602；所述人GCRG213蛋白為序列表序列1所示蛋白。

本發明保護保藏號為CGMCC?No.7602的雜交瘤細胞株GCRG213。該雜交瘤細胞株已于2013年05月08日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，保藏號為CGMCC?No.7602。

本發明所提供的單克隆抗體或雜交瘤細胞株可用于制備檢測或輔助檢測人GCRG213蛋白的試劑或試劑盒；所述人GCRG213蛋白為序列表序列1所示蛋白。

本發明第三個目的是提供一種檢測或輔助檢測人GCRG213蛋白的酶聯免疫試劑盒。

本發明提供的試劑盒，其包括獨立包裝的上述的單克隆抗體，所述人GCRG213蛋白為序列表序列1所示蛋白。

本發明的實驗證明，以組氨酸標記的序列表序列1所示蛋白為免疫原免疫小鼠，取脾細胞與SP2/0細胞進行細胞融合獲得雜交瘤細胞株GCRG213CGMCC?No.7602，該雜交瘤細胞株所穩定分泌的抗蛋白GCRG213的單克隆抗體的親和常數達2.0×10⁹L/mol。以該單克隆抗體為檢測抗體建立的酶聯免疫方法檢測蛋白GCRG213，檢測限為0.9—0.001ug/ml本發明所提供的抗蛋白GCRG213的單克隆抗體具有檢測限低，檢測范圍廣，且高效、準確的優點，可廣泛應用于人蛋白GCRG213的定性和定量檢測。

附圖說明

圖1為PCR擴增GCRG213編碼基因的瓊脂糖凝膠電泳結果。其中，泳道M為DNAMarker；泳道1為PCR擴增產物。

圖2為目的蛋白GCRG213的SDS-PAGE分析結果。其中，泳道M為蛋白Marker。

圖3為抗蛋白GCRG213的單克隆抗體的Western?blot鑒定結果。

圖4為抗蛋白GCRG213的單克隆抗體在正常胃黏膜組織(圖A)、胃癌組織(印戒細胞癌)(圖B)的免疫組化結果(放大倍數：400)。

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。

實施例1、雜交瘤細胞株的獲得及抗人胃癌相關蛋白GCRG213的單克隆抗體的制備

一、免疫原的制備

1、全基因合成

以pGEM-T質粒為模板，使用引物5′-cgcgaattcATGCAACAAGAAGAGCTAACTATCCTAAATA-3′和5′-cgcaagcttaGTTTTGAGTGAGCTTCTTAATCCTAAGTTCG-3′，進行PCR擴增，將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳(結果如圖1所示)，回收純化426bp的DNA片段，將該片段連接于載體pGEM-T的TA克隆位點處，經測序證實，獲得了在載體pGEM-T的TA克隆位點處插入序列表序列2所示DNA片段的重組載體pGEM-T-G。序列表序列2自5’末端13-438位核苷酸為序列表序列1所示人GCRG213蛋白的編碼序列。

2、重組表達載體的構建