[發明專利]用于檢測人類BCR-ABL基因突變的引物、探針及試劑盒

在審

• 申請號: 201410652876.4
• 申請日: 2014-11-14
• 公開（公告）號: CN104372094A
• 公開（公告）日: 2015-02-25
• 發明（設計）人: 李文欣;金雪花
• 申請（專利權）人: 遼寧邁迪生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明涉及基因突變的檢測，具體地涉及一種用于檢測人類BCR-ABL基因突變的引物、探針及試劑盒。

背景技術

慢性粒細胞自血病(CML)是一種起源于造血干細胞的惡性增殖性疾病，占全部白血病的13％，以9號和22號染色體易位t(9：22)(q34；ql1)形成的費城染色體(Ph)為特征。該易位形成一種新的融合基因(BCR-ABL)，此基因編碼融合型蛋白p210，即一種活性酪氨酸激酶，能夠導致髓系造血的異常克隆性增殖，這是導致CML的根本原因，也是治療的靶向位點。

伊馬替尼是首個被批準應用于一線治療CML的酪氨酸激酶抑制劑。伊馬替尼能夠靶向作用于BCR-ABL，顯示了其卓越的臨床療效。然而，仍有17％CML患者不能獲得完全細胞遺傳學反應(CCyR)，約18％已獲得CCyR的患者最終失去療效，14％已獲得CCyR的患者不能獲得主要分子學反應(MMR)，6％的患者對伊馬替尼不耐受。

達沙替尼(Dasatinib)是一種人工合成的BCR-ABL和Src激酶雙重抑制劑，用于治療甲磺酸伊馬替尼耐藥或不能耐受的慢性骨髓性白血病所有病期的成人患者。FDA已經批準達沙替尼治療對其他療法耐藥或不能耐受的費城染色體陽性的急性淋巴細胞性白血病成人患者。達沙替尼雖然對多數的突變位點都可以起作用，但是也有部分位點出現突變會導致其耐藥。因此對其耐藥位點進行基因檢測對于指導病人臨床用藥具有重要的參考價值。

達沙替尼是第2代BCR-ABL酪氨酸激酶抑制劑，其對BCR-ABL活性的抑制作用比伊馬替尼強325倍，比尼洛替尼強16倍。能夠抑制多數引起伊馬替尼耐藥的BCR-ABL突變，但仍有一些突變會導致患者產生耐藥，例如：V299L、F317L/C等。因此對其耐藥位點進行基因檢測對于指導病人臨床用藥具有重要的參考價值。

目前，針對基因突變檢測主要取樣于腫瘤組織。但臨床上初診的70％-80％的癌癥病人都已經到了晚期，失去了手術機會，腫瘤組織獲取困難，以致失去檢測機會。臨床迫切需要建立簡便而廣泛使用的監測指標，評價患者個體對靶向藥物的耐藥性(或敏感性)，減少盲目用藥給病人帶來的經濟損失。

外周血取樣具有取材簡便的優點，是臨床上進行病情監測的首選標本來源。研究表明，實體腫瘤患者的血循環中大量存在游離的腫瘤DNA，其含量約為健康人的10倍以上。近年來，隨著核酸擴增技術的不斷優化，國外開始報道采用外周血標本檢測游離DNA基因突變，靈敏度和特異性與組織標本的結果符合率較高，這極大促進了靶向藥物基因突變檢測方法的研究進展，以游離DNA為靶分子探討臨床藥物療效及預后分子標志物正成為目前的研究熱點。但是，外周血液中癌細胞的突變DNA是存在于大量野生型基因背景下的極為稀少的突變基因，其存在比率一般小于0.2％。因此，能否準確無創的檢測這類稀有突變對現有檢測技術提出了挑戰。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供一種用于檢測人類BCR-ABL基因突變的引物、探針及試劑盒。

為實現上述目的本發明采用的技術方案為：

一種用于檢測人類BCR-ABL基因突變的引物、探針，由以下3組突變引物和探針序列中的一組或幾組的組合：

(1)GATCAAACACCCTAACTAGC(SEQ?ID?NO：1)

GTCGGCAGAGCACAAATATTC(SEQ?ID?NO：2)

FAM--CAGCTCCTTGGTGAGTAAGCC--BHQ1(SEQ?ID?NO：3)

(2)GTCAGAATCCTTCAGAACGC(SEQ?ID?NO：4)

GGAGGTTCCCGTAGGTTGTC(SEQ?ID?NO：5)

FAM--CCACGTGTTGAAGTCCTCGTTG--BHQ1(SEQ?ID?NO：6)

(3)CGTTCTATATCATCACTGTCTG(SEQ?ID?NO：7)

CCTCTACCTGTGGATGAAGT(SEQ?ID?NO：8)

FAM--CTTCTCCAGGTACTCCATGGC--BHQ1(SEQ?ID?NO：9)