[發(fā)明專利]基于中藥藥渣生產(chǎn)漆酶酶液及粉狀漆酶的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410652136.0
• 申請日: 2014-11-17
• 公開（公告）號: CN104357412B
• 公開（公告）日: 2018-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 岳鹍;劉鵬;潘志恒;安娜;侯瑋;王鹿;孫勇民
• 申請（專利權(quán)）人: 天津現(xiàn)代職業(yè)技術(shù)學(xué)院;天津市輕工業(yè)化學(xué)研究所有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 天津創(chuàng)智天誠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)12214
• 代理人: 田陽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于中藥藥渣生產(chǎn)漆酶酶液及粉狀漆酶的方法。

背景技術(shù)

漆酶(Laccase，EC1.10.3.2)是一類含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍(lán)氧化酶家族。漆酶廣泛存在于真菌、細(xì)菌、昆蟲和植物中，其中研究和應(yīng)用最為廣泛的是真菌漆酶，主要集中在擔(dān)子菌和子囊菌，擔(dān)子菌類的白腐菌是自然界中漆酶最主要的生產(chǎn)者。白腐真菌漆酶具有較高的氧化還原電勢和非常廣泛的底物范圍，可以催化氧化酚類化合物,降解酚類及木素類化合物。近年來，白腐真菌漆酶在紙漿生物漂白、有機(jī)染料脫色、工業(yè)廢水處理和高分子催化合成等方面，表現(xiàn)出了很大的研究價(jià)值和應(yīng)用潛力。但是白腐真菌漆酶應(yīng)用于上述工業(yè)領(lǐng)域，需要解決的一個(gè)關(guān)鍵性因素是如何在控制發(fā)酵成本的前提下提高漆酶產(chǎn)量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種基于中藥藥渣生產(chǎn)漆酶酶液的方法，該方法簡單環(huán)保，降低了漆酶生產(chǎn)的工業(yè)成本，以中藥藥渣為主要原料進(jìn)行漆酶發(fā)酵生產(chǎn)，不僅可以促進(jìn)白腐真菌生長，提高漆酶產(chǎn)量，而且能夠充分利用低價(jià)值的廢棄物，在降低漆酶生產(chǎn)成本的同時(shí)，減少藥渣焚燒處理對環(huán)境造成的影響。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種基于中藥藥渣生產(chǎn)粉狀漆酶的方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

一種基于中藥藥渣生產(chǎn)漆酶酶液的方法，其步驟：

⑴、PDA固體培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：以質(zhì)量體積濃度計(jì)，馬鈴薯汁20％，葡萄糖2％，瓊脂2％，KH₂PO₄0.3％，MgSO₄·7H₂O 0.15％，在121℃高壓蒸汽滅菌20min后制備完成；

⑵、種子培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：以質(zhì)量體積濃度計(jì)，馬鈴薯汁20％，葡萄糖2％，酒石酸銨0.2％，自然pH值，在121℃高壓蒸汽滅菌20min后制備完成；

⑶、發(fā)酵產(chǎn)酶種子液的制備：取斜面菌種一環(huán)在PDA固體培養(yǎng)基上點(diǎn)接菌絲，30℃培養(yǎng)7天，切取3塊直徑大小為6mm左右的菌落接入裝有50mL種子培養(yǎng)基的250mL規(guī)格的三角瓶中，加入玻璃珠10粒，置于搖床，轉(zhuǎn)速控制在200rpm，溫度30℃，恒溫培養(yǎng)2-4天，得到發(fā)酵產(chǎn)酶種子液；

⑷、發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基的制備：以質(zhì)量百分含量計(jì)，中藥藥渣30-40％，豆粕10％，麥麩10％，水量40-50％，CaCl₂0.5％，KH₂PO₄0.5％，MgSO₄·7H₂O 0.2％，自然pH值，在1.01MPa，121℃高壓蒸汽滅菌20min后制備完成；

⑸、發(fā)酵產(chǎn)酶：接種量6-10％，溫度24-30℃，自然濕度，恒溫發(fā)酵6-9天，得到發(fā)酵后的培養(yǎng)物；

⑹、漆酶酶液提取：向發(fā)酵后的培養(yǎng)物中加入其重量2-6倍的水，在25-40℃下浸提4-6小時(shí)后經(jīng)過離心、過濾，即得到漆酶酶液。

而且，所述的中藥藥渣為大黃藥渣、虎杖藥渣或者兩者任意配比的組合藥渣。

而且，所述的中藥藥渣含水量在30％-40％。

而且，所述的斜面菌種為白腐真菌菌株。

而且，所述的馬鈴薯汁的制備為取馬鈴薯，切成小片或小塊，加水煮20-30min，用4-6層紗布過，取濾液即得到馬鈴薯汁。

一種基于中藥藥渣生產(chǎn)粉狀漆酶的方法，其步驟：

⑴、PDA固體培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：以質(zhì)量體積濃度計(jì)，馬鈴薯汁20％，葡萄糖2％，瓊脂2％，KH₂PO₄0.3％，MgSO₄·7H₂O 0.15％，在121℃高壓蒸汽滅菌20min后制備完成；

⑵、種子培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：以質(zhì)量體積濃度計(jì)，馬鈴薯汁20％，葡萄糖2％，酒石酸銨0.2％，自然pH值，在121℃高壓蒸汽滅菌20min后制備完成；

⑶、發(fā)酵產(chǎn)酶種子液的制備：取斜面菌種一環(huán)在PDA固體培養(yǎng)基上點(diǎn)接菌絲，30℃培養(yǎng)7天，切取3塊直徑大小為6mm左右的菌落接入裝有50mL種子培養(yǎng)基的250mL規(guī)格的三角瓶中，加入玻璃珠10粒，置于搖床，轉(zhuǎn)速控制在200rpm，溫度30℃，恒溫培養(yǎng)2-4天，得到發(fā)酵產(chǎn)酶種子液；