[發明專利]一種肌紅蛋白檢測試劑及其制備方法有效

申請號：	201410648653.0	申請日：	2014-11-17
公開（公告）號：	CN104391124A	公開（公告）日：	2015-03-04
發明（設計）人：	王會中	申請（專利權）人：	中國人民解放軍第三0五醫院
主分類號：	G01N33/72	分類號：	G01N33/72;G01N33/577
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地址：	100017 ***	國省代碼：	北京;11
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種肌紅蛋白檢測試劑及其制備方法
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【說明書】：

【技術領域】

本發明涉及一種肌紅蛋白檢測試劑及其制備方法，具體涉及一種用于檢測血清或血漿中MYO的勻相溶膠顆粒型MYO免疫測定試劑及其制備方法，屬于醫療器械體外診斷試劑領域。

【背景技術】

肌紅蛋白(Myoglobin，MYO)是一種氧結合血紅素蛋白，主要分布于心肌和骨骼肌組織。1960年由Kendrew用X線衍射法闡明，這是世界上第一個被描述的蛋白質三級結構。在急性心肌損傷時，MYO最先被釋放入血液中，在癥狀出現約2～3小時后，血中MYO可超出正常上限，9～12小時達到峰值，24～36小時后恢復正常。對于懷疑ACS的病人建議連續采樣測定，因為癥狀出現和蛋白標志物釋放到血液之間有一段延遲。在ACS早期診斷和監測的臨床效用已有大量文獻報告，MYO陰性有助于排除心梗。

測定血清肌紅蛋白肌紅蛋白可作為急性心肌梗死(AMI)診斷的早期最靈敏的指標。但特異性差，骨骼肌損傷、創傷、腎功能衰竭等疾病，都可導致其升高。MYO陽性雖不能確診AMI，但可用于早期排除AMI診斷的重要指標，如MYO陰性，則基本排除心肌梗死，還可用于再梗死的診斷，結合臨床，如MYO重新升高，應考慮為再梗死或者梗死延展。

【發明內容】

為解決上述問題，本發明的目的在于提供一種分析靈敏度高，檢測線性范圍大，使用方便且檢測快速的基于膠體金勻相免疫法的肌紅蛋白檢測試劑。

本發明的第二目的在于提供一種肌紅蛋白檢測試劑的制備方法。

為實現上述第一目的，本發明采取的技術方案為：一種肌紅蛋白檢測試劑，其由試劑一和試劑二配合而成，其中，所述試劑一和試劑二的體積比為5∶1；所述試劑一中包括：20～50mmol/L的緩沖液、2％w/v的促凝劑、2％w/v的BSA、0.1％～0.5％w/v的防腐劑；所述試劑二中包括：0.1％～0.5％w/v標記有抗人MYO抗體的膠體金顆粒、2％～5％w/v的穩定劑、20～50mmol/L的緩沖液、0.1％～0.5％w/v的防腐劑；所述標記有抗人MYO抗體的膠體金顆粒的直徑為60nm～90nm。

本發明的肌紅蛋白檢測試劑進一步為：所述試劑一和試劑二中的緩沖液具體為含有0.5％～5.0％w/vBSA的Tris-HCl緩沖液、HEPES緩沖液、硼酸鹽緩沖液或甘氨酸緩沖液中的一種或幾種。

本發明的肌紅蛋白檢測試劑進一步為：所述試劑一、試劑二的pH值為7.0～9.0。

本發明的肌紅蛋白檢測試劑進一步為：所述BSA濃度為1％w/v，試劑一、試劑二的pH值為8.0±0.2。

本發明的肌紅蛋白檢測試劑進一步為：所述試劑一中的促凝劑為PEG6000或Brij-35中的至少任一種。

本發明的肌紅蛋白檢測試劑進一步為：所述試劑二中的膠體金顆粒直徑為75nm～85nm，顆粒含量為0.08～0.8mg/mL。

本發明的肌紅蛋白檢測試劑進一步為：所述膠體金顆粒含量為0.4mg/mL。

本發明的肌紅蛋白檢測試劑還為：所述標記有抗人MYO抗體為具有不同免疫活性位點多個克隆株單抗的混合物。

為實現上述第二目的，本發明采取的技術方案為：一種肌紅蛋白檢測試劑的制備方法，其包括如下步驟：

1)，將促凝劑、BSA和防腐劑加入到緩沖液，制得試劑一；

2)，將氯金酸與檸檬酸三鈉按照質量比1∶1加熱煮沸制得膠體金溶液；將MYO抗體加入到膠體金溶液中，并加入穩定劑、緩沖液、防腐劑，制得試劑二；其中，配置氯金酸與檸檬酸三鈉溶液時，使用0.2μm濾膜過濾；

3)，將試劑一和試劑二按照5∶1的體積比配合使用，即得肌紅蛋白檢測試劑。

為實現上述第二目的，本發明采取的另一技術方案為：一種肌紅蛋白檢測試劑的制備方法，其包括如下步驟：