[發明專利]一種快速鑒定灰葡萄孢菌對多菌靈抗性基因型F200Y菌株的分子檢測方法有效
| 申請號： | 201410646783.0 | 申請日： | 2014-11-11 |
| 公開（公告）號： | CN104313177A | 公開（公告）日： | 2015-01-28 |
| 發明（設計）人： | 段亞冰;周明國;楊瑩;張曉柯;王建新 | 申請（專利權）人： | 南京農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 210095 江蘇省南*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 鑒定 葡萄 多菌靈 抗性 基因型 f200y 菌株 分子 檢測 方法 | ||
1.一種基于LAMP技術快速鑒定灰葡萄孢菌對多菌靈抗性基因型F200Y菌株的分子檢測方法，步驟是：
(1)運用兩對特異性引物對待測樣品的基因組DNA進行LAMP恒溫擴增，其中所述的兩對特異性引物的堿基序列分別是：
LAMP反應所用的外引物對：
F3：ATCGCCAAAGGTTTCCGATA
B3：AGGTGGTAACACCGGACAT
LAMP反應所用的內引物對：
FIP：TGGTCTCGTCAGAGTTCTCAACCAGTTGTCGAGCCATATAACGCA
BIP：TGCATGAGAACCTTGAAGCTCAGCGACGGCGGAAACCAAGTG
(2)對上述LAMP擴增產物觀察其顏色變化，并在3.0％瓊脂糖凝膠電泳上分離，觀察擴增結果；
(3)鑒定是否為多菌靈抗性基因型F200Y的灰葡萄孢菌株；LAMP擴增產物顯示天藍色，電泳圖譜應為梯狀條帶，判定為抗性基因型F200Y的灰葡萄孢菌株；擴增產物為紫色，電泳圖譜無條帶擴增，判定為非抗性基因型F200Y的灰葡萄孢菌株。
2.根據權利要求1所述快速鑒定灰葡萄孢菌對多菌靈抗性基因型F200Y菌株的分子檢測方法，其特征在于：步驟(1)所述的LAMP總體積優選為10μL：
3.根據權利要求1所述快速鑒定灰葡萄孢菌對多菌靈抗性基因型F200Y菌株的分子檢測方法，其特征在于：步驟(1)所述的LAMP反應參數優選為60℃?45min，80℃?10min。
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