[發明專利]一種基于微流控芯片的肺炎支原體和流感病毒特異抗體IgM的檢測方法

有效

• 申請號: 201410646199.5
• 申請日: 2014-11-14
• 公開（公告）號: CN104360060B
• 公開（公告）日: 2016-11-02
• 發明（設計）人: 蔣興宇;張曉青;張偉;曹豐晶;陳翊平;牛亞靜;沈海瀅
• 申請（專利權）人: 國家納米科學中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/545;G01N21/76
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;楊晞

1.一種基于微流控芯片的肺炎支原體和流感病毒的特異抗體IgM的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)檢測芯片的制作：將芯片與固相反應基底貼合后形成封閉的微流管道，向所述微流管道中通入肺炎支原體和/或流感病毒的特異性重組蛋白抗原，所述特異性重組蛋白抗原包被在基底上；包被好后，抽出包被液，揭去所述芯片，并貼上另一芯片，使兩塊芯片上的管道相互交叉，將其與基底密封后，向微流管道通入封閉液，封閉后抽出封閉液；

(2)向步驟(1)所述檢測芯片中的微流管道加樣孔中加入被檢測樣品，孵育，洗滌；

(3)向步驟(2)所述微流管道中加入酶標記的檢測抗體，洗滌；

(4)向步驟(3)所述微流管道中加入化學發光液，通過化學發光檢測儀進行檢測。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述兩塊芯片上的管道相互垂直，交叉角度為90°；

優選地，所述芯片為經手工翻模或注塑而成的帶有并行微流管道的芯片；

優選地，所述芯片帶有7條并行微流管道；優選地，所述微流管道長度為3-5cm，所述微流管道直徑500-600μm，高度500-600μm，所述微流管道的間距為1-3mm。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述固相反應基底為聚苯乙烯、聚二甲基硅氧烷或聚甲基丙烯酸甲酯，優選為聚苯乙烯。

4.如權利要求1-3之一所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述被檢測樣品為血清。

5.如權利要求1-4之一所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述孵育時間為10-20min，優選為15min。

6.如權利要求1-5之一所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述酶標記的檢測抗體為經過優化的HRP標記的羊抗人IgM抗體。

7.如權利要求1-6之一所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述化學發光液為魯米諾化學發光底物。

8.如權利要求1-7之一所述的方法，其特征在于，所述洗滌用的洗滌液為經過優化的含有0.05％吐溫的洗滌液。

9.如權利要求1-8之一所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)檢測芯片的制作：將芯片與固相反應基底貼合后形成封閉的微流管道，向所述微流管道中分別通入肺炎支原體和流感病毒的特異性重組蛋白抗原，所述特異性重組蛋白抗原包被在基底上；包被好后，抽出包被液，揭去所述芯片，并貼上另一芯片，使兩塊芯片上的管道相互垂直，交叉角度為90°，將其與基底密封后，向微流管道通入BSA封閉液，封閉后抽出封閉液；

(2)向步驟(1)所述檢測芯片中的微流管道加樣孔中加入血清，孵育15min，用經過優化的含有0.05％吐溫的洗滌液進行洗滌；

(3)向步驟(2)所述微流管道中加入經過優化的HRP標記的羊抗人IgM抗體，用經過優化的含有0.05％吐溫的洗滌液進行洗滌；

(4)向步驟(3)所述微流管道中加入魯米諾化學發光底物，通過化學發光檢測儀進行檢測。

10.根據權利要求1-9之一所述的方法在肺炎和流感檢測中的應用。