[發明專利]一種產膽鹽水解酶副干酪乳桿菌干粉活菌制劑的生產技術

在審

• 申請號: 201410642107.6
• 申請日: 2014-11-14
• 公開（公告）號: CN104357359A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 劉慧;張紅星;熊利霞;謝遠紅;高秀芝;金君華
• 申請（專利權）人: 北京北農匯邦生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/225
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.副干酪乳桿菌(Lactobacillus?paracasei)KL1-Liu?CGMCC?No.7029。

2.一種利用產膽鹽水解酶的副干酪乳桿菌(Lactobacillus?paracasei)KL1-Liu?CGMCC?No.7029菌株小試生產干粉活菌制劑的方法，其特征在于：將副干酪乳桿菌KL1-Liu以改良MRS培養基于37℃培養16h，如此活化2～3代；將活化好的菌液以3％的接種量移種至501油菜籽蛋白胨改良MRS培養基中，于37℃培養16h，得到擴大培養液；501油菜籽蛋白胨改良MRS培養基配方組成：葡萄糖20g、501油菜籽蛋白胨25g、檸檬酸二銨2g、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、七水合硫酸鎂0.58g、四水合硫酸錳0.25g、吐溫-80?1mL、蒸餾水1000mL，調節pH為7.0；將上述擴大培養液按4％的接種量移種至2L?501油菜籽蛋白胨改良MRS發酵培養基中，利用5L自動發酵罐進行滅菌和高密度發酵，控制發酵溫度34℃，發酵液pH6.5，攪拌轉速90r/min，發酵時間16h，得到發酵液；將發酵液于4℃、4000r/min離心20min，收集得到菌泥；在600mL滅菌凍干瓶中，按離心前發酵液1/10體積的量(200mL)，加入14.5％麥芽糊精+5.5％脫脂奶粉的凍干保護劑與收集的菌泥，混合均勻后，得到濃縮發酵劑；將每個凍干瓶裝量為100mL的濃縮發酵劑于-30℃預凍13h至完全凍結狀態，得到預凍發酵劑；利用美國6L?LABCONCO真空冷凍干燥機將預凍發酵劑于-55℃、真空度0.13mBar的條件下，凍干48h至完全干燥狀態，得到產膽鹽水解酶副干酪乳桿菌干粉活菌制劑。

3.一種利用產膽鹽水解酶的副干酪乳桿菌(Lactobacillus?paracasei)KL1-Liu?CGMCC?No.7029菌株中試生產干粉活菌制劑的方法，其特征在于：將副干酪乳桿菌KL1-Liu以改良MRS培養基于37℃培養16h，如此活化2～3代；將活化好的菌液以3％的接種量移種至501油菜籽蛋白胨改良MRS培養基中，于37℃培養16h，得到擴大培養液；501油菜籽蛋白胨改良MRS培養基配方組成：葡萄糖20g、501油菜籽蛋白胨25g、檸檬酸二銨2g、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、七水合硫酸鎂0.58g、四水合硫酸錳0.25g、吐溫-801mL、蒸餾水1000mL，調節pH為7.0；將上述擴大培養液按4％的接種量移種至25L?501油菜籽蛋白胨改良MRS發酵培養基中，利用50L自動發酵罐進行滅菌和高密度發酵，控制發酵溫度34℃，發酵液pH6.5，攪拌轉速140r/min，發酵時間16h，得到發酵液；將發酵液于3～6℃條件下，16000r/min離心10～20min，收集得到菌泥；在凍干托盤中按離心前發酵液1/10體積的量(2500mL)，加入14.5％麥芽糊精+5.5％脫脂奶粉的凍干保護劑與收集的菌泥，混合均勻后，得到濃縮發酵劑；將濃縮發酵劑于-55℃預凍17h至完全凍結狀態，得到預凍活菌制劑；利用北京四環真空冷凍干燥機將預凍活菌制劑于-66℃、真空度0.08mBar的條件下，凍干72h至完全干燥狀態，得到產膽鹽水解酶副干酪乳桿菌干粉活菌制劑。