[發明專利]一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法

在審

• 申請號: 201410634645.0
• 申請日: 2014-11-12
• 公開（公告）號: CN104450534A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 張忠;陳丹;劉婧;張瑞玲;史衛峰
• 申請（專利權）人: 泰山醫學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01P7/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

技術領域

本發明涉及一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法。

背景技術

球孢白僵菌(Verticillium?lecanii)是一種昆蟲病原真菌,屬于半知菌亞綱絲抱菌類輪枝菌屬匍匐組,其寄主范圍包括鞘翅目、鱗翅目、半翅目、纓翅目、直翅目、膜翅目、雙翅目、彈尾目、癭螨、線蟲，甚至還能寄生植物病菌，遺傳穩定性較好，對人、畜、禽類和植物均無害，是一種廣闊應用前景的生防真菌，但應用過程中，在人工培養基上經過幾代連續接種培養后，其對害蟲的毒力會顯著下降，甚至喪失，嚴重制約了球孢白僵菌資源的進一步開發利用。因此，亟需建立一種適合連續培養又能保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法。

發明內容

本發明是為了解決上述不足，提供了一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法。

本發明的上述目的通過以下的技術方案來實現：一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)配制適合球孢白僵菌生長的PDA培養基；

(2)收集球孢白僵菌的寄主昆蟲，-70℃冷凍12h后，充分研磨成粉狀物，做成保持毒力添加劑；

(3)按100g培養基中按50-200頭寄主昆蟲當量(可根據寄主昆蟲體型進行調節)的比例加入保持毒力添加劑，滅菌，冷卻后制成球孢白僵菌保持毒力培養基；

(4)在保持毒力培養基上接種球孢白僵菌的孢子，置于29℃，光照培養箱(L：D＝12：12)內培養；

(5)待菌絲長出孢子后，在無菌操作臺內，以刮刀刮下孢子，用于液體發酵培養或配成一定濃度懸濁液直接用于害蟲防治。

本發明與現有技術相比的優點是：本方法可長久保持球孢白僵菌對寄主昆蟲的毒力，并且可根據不同的寄主昆蟲進行馴化，做某種害蟲的專用殺蟲劑，以達到更加有效的防治效果。而且針對不同寄主昆蟲馴化的菌株，可根據防治害蟲的種類進行混合應用，效果更好。

附圖說明

圖1在保持毒力培養基和普通培養基上培養不同代數的球孢白僵菌對家蠅成蟲的致死中濃度的示意圖表。

圖2在保持毒力培養基和普通培養基上培養不同代數的球孢白僵菌對家蠅成蟲的致死中時間的示意圖表。

具體實施方式

下面結合附圖對本發明進一步詳述。

一株防治家蠅的球孢白僵菌，一種按照100gPDA培養基內按200頭蠅蛆當量的比例加入本發明的保持毒力添加劑做成保持毒力培養基1，按照100gPDA培養基內按50頭蠅蛆當量的比例加入保持毒力添加劑制成保持毒力培養基2，分別接種球孢白僵菌，產孢后在相同培養基上連續接種20代，檢測每一代孢子對家蠅的毒力，以普通PDA培養基上連續接種的球孢白僵菌孢子作為對照。結果表明，在普通培養基上連續接種5代后，其對家蠅成蟲的毒力顯著下降，致死中濃度LC50逐漸增加(圖1)，10代之后，其對家蠅成蟲的致死中濃度升高為原來20倍以上，20代以后，致死中濃度升高為原來的600倍以上，而在本發明的保持毒力培養基1和2上其致死中濃度基本沒有變化，說明其毒力基本沒有下降。同時，在普通培養基上培養10代后，球孢白僵菌對家蠅成蟲的致死中時間延長為原來的4倍，培養20代后延長為原來的10倍(圖2)，而在保持毒力培養基上的連續接種20代后，球孢白僵菌孢子對家蠅成蟲的致死中時間僅延長為原來的2倍，依然保持對家蠅成蟲的高致病力。因此，在100g?PDA培養基中接50頭和200頭蠅蛆當量的保持毒力添加劑，均可達到保持球孢白僵菌孢子對家蠅成蟲的高毒力的目的。說明在PDA培養基上加入家蠅幼蟲的磨碎物是一種保持球孢白僵菌對家蠅毒力的可靠方法，其接入比例可按照100g?PDA培養基中加入50-200頭3齡蠅蛆當量的保持毒力添加劑。

以上所述僅為本發明的實施例，并非因此限制本發明的專利范圍，凡是利用本發明說明書及附圖內容所作的等效結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關的技術領域，均同理包括在本發明的專利保護范圍內。