[發(fā)明專利]一種自養(yǎng)與異養(yǎng)混合培養(yǎng)小球藻的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410632577.4
• 申請(qǐng)日: 2014-11-11
• 公開（公告）號(hào): CN104357330A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮濤;趙曉霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 甘肅德福生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/12
• 分類號(hào): C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種自養(yǎng)與異養(yǎng)混合培養(yǎng)小球藻的方法，其特征在于，包括在機(jī)械攪拌發(fā)酵罐異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻、藻液稀釋和光自養(yǎng)培養(yǎng)小球藻三個(gè)階段：

1)機(jī)械攪拌發(fā)酵罐異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻：在機(jī)械攪拌發(fā)酵罐中加入pH為6.5～7.5的異養(yǎng)培養(yǎng)液，小球藻接種量為10％工作體積，培養(yǎng)溫度28～30℃，控制pH在6.5～7.5范圍內(nèi)，控制DO值(溶氧量)在20％～40％范圍內(nèi)，至小球藻細(xì)胞密度最高時(shí)結(jié)束培養(yǎng)；

2)藻液稀釋：用培養(yǎng)基將步驟1)獲得的藻液稀釋至細(xì)胞密度為15～25g/L，pH維持6.5～7.5；

3)光自養(yǎng)培養(yǎng)小球藻：將步驟2)獲得的稀釋液轉(zhuǎn)入光自養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28～30℃，光照強(qiáng)度2000～5000lux。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種自養(yǎng)與異養(yǎng)混合培養(yǎng)小球藻的方法，其特征在于，所述步驟1)機(jī)械攪拌發(fā)酵罐異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻和步驟3)光自養(yǎng)培養(yǎng)小球藻過程采用補(bǔ)料流加培養(yǎng)形式對(duì)小球藻進(jìn)行培養(yǎng)，補(bǔ)料為異養(yǎng)培養(yǎng)液和自養(yǎng)培養(yǎng)液，補(bǔ)料方式如下：自接種開始，第24h補(bǔ)料60mL，第48h補(bǔ)料100mL，第72h補(bǔ)料50mL，以后每隔24h補(bǔ)料50mL至不再增長(zhǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種自養(yǎng)與異養(yǎng)混合培養(yǎng)小球藻的方法，其特征在于，所述步驟1)機(jī)械攪拌發(fā)酵罐異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻過程無需光照，在黑暗中培養(yǎng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種自養(yǎng)與異養(yǎng)混合培養(yǎng)小球藻的方法，其特征在于，所述步驟1)機(jī)械攪拌發(fā)酵罐異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻中的異養(yǎng)培養(yǎng)液是在BG-11基礎(chǔ)上優(yōu)化的液體培養(yǎng)基，其成分是：NaNO₃1.5g/L，K₂HPO₄·3H₂O?0.04g/L，MgSO₄·7H₂O?0.075g/L，CaCl₂·7H₂O?0.036g/L，Na₂‐EDTA?0.001g/L，Na₂CO₃0.02g/L，乙酸鈉0.01g/L，檸檬酸0.006g/L，檸檬酸鐵銨0.006g/L，微量元素A5溶液1mL/L，蒸餾水。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種自養(yǎng)與異養(yǎng)混合培養(yǎng)小球藻的方法，其特征在于，所述微量元素A5溶液成分:H₃BO₃2.86g/L，MnCl₂·4H₂O?1.86g/L，ZnSO₄·7H₂O?0.222g/L，Na₂MoO₄·2H₂O?0.39g/L，CuSO₄·5H₂O?0.079g/L，CoCl₂·6H₂O0.04g/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種自養(yǎng)與異養(yǎng)混合培養(yǎng)小球藻的方法，其特征在于，所述異養(yǎng)培養(yǎng)液的N/P為30。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種自養(yǎng)與異養(yǎng)混合培養(yǎng)小球藻的方法，其特征在于，所述步驟3)光自養(yǎng)培養(yǎng)過程光源是自然光。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種自養(yǎng)與異養(yǎng)混合培養(yǎng)小球藻的方法，其特征在于，所述步驟3)光自養(yǎng)培養(yǎng)采用自養(yǎng)培養(yǎng)液，其成分是尿素0.32g/L，磷酸二氫鉀0.156g/L，七水硫酸鎂0.146g/L，氯化鐵0.001g/L。

9.根據(jù)權(quán)利要求1～8所述的一種自養(yǎng)與異養(yǎng)混合培養(yǎng)小球藻的方法，其特征在于，所述全部培養(yǎng)步驟全過程均在無菌條件下進(jìn)行。