[發明專利]一種復合酶協同高壓熱水浸提法提取金針菇多糖的方法

在審

• 申請號: 201410631892.5
• 申請日: 2014-11-12
• 公開（公告）號: CN104387485A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 王廣慧
• 申請（專利權）人: 綏化學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司 23206
• 代理人: 高媛

技術領域

本發明涉及一種金針菇多糖的提取方法，尤其涉及一種利用復合酶解協同高壓熱水浸提法從金針菇中快速、高效提取多糖的新工藝。

背景技術

金針菇（Flammulina?velutiper?(Fr.)?Sing），學名毛柄金錢菌，屬擔子菌綱傘菌目白蘑科金錢菌屬，是最常見的食用菌之一。其營養豐富，多糖為其主要有效成分。研究表明，金針菇多糖具有廣泛的藥理活性，可抑制腫瘤的發生、發展與轉移，并能增強體液免疫和細胞免疫，具有抗逆轉錄病毒活性和降血脂、抗衰老、護肝等作用，且毒副作用很小。目前實驗室多采用熱水浸提法，或以超聲波、微波及酶等輔助熱水浸提。這些方法不僅浸提時間長，而且提取率普遍不高。而在目前企業所采用的金針菇多糖生產工藝中，多采用熱水浸提法，能耗大，提取時間長，且提取率不高。??

發明內容

本發明的目的是克服現有技術存在的缺點，提供一種復合酶協同高壓熱水浸提法提取金針菇多糖的方法，即提供一種可以部分取代現有生產工藝的簡便易行、高效、快速、成本低并減少環境污染的新方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種復合酶協同高壓熱水浸提法提取金針菇多糖的方法，包括以下步驟：

一、按照料液比為1:30~70g/mL的比例向金針菇子實體干粉中加入緩沖液，再加入一定量的復合酶進行的酶解反應，其中復合酶的添加量為金針菇子實體干粉質量的0.5~1.5%，反應時間為50~90?min，酶解溫度為30~70℃，酶解pH值為3~7。

二、酶解后，進行高壓熱水浸提，控制浸提溫度為75~121℃，浸提時間為40~120?min。

三、提取后進行離心，取上清液，濃縮，采用Sevage法除蛋白，離心，將上清液醇沉過夜，離心，所得沉淀用無水乙醇洗滌2~3次，將沉淀干燥得到金針菇多糖。

本發明中，所述金針菇子實體干粉，是經高速粉碎機粉碎后過60目篩得到的。

本發明中，所述緩沖液為磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液。

本發明中，所述料液比優選1:60g/mL。

本發明中，所述復合酶由比活力為10000U/g的纖維素酶和比活力為50000U/g的木瓜蛋白酶按1:1的質量比混合而成。

本發明中，所述復合酶的添加量優選為金針菇子實體干粉質量的1.25%。

本發明中，所述酶解反應時間優選80?min、酶解溫度優選50℃、酶解pH值優選6。

本發明中，所述高壓熱水浸提溫度優選108℃，浸提時間優選80?min。

本發明中，所述高壓浸提后對離心的上清液所采取的濃縮方法可以是減壓濃縮或在70℃水浴下蒸發濃縮到原體積的1/2。

本發明中，所述Sevage法除蛋白是采用氯仿-正丁醇混合溶液（體積比為4:1的混合液）按與樣物提取液4:1(v:v)添加，充分振搖30?min后靜置12?h。

本發明中，所述醇沉是將除蛋白后經離心得到的上清液與95%乙醇按1:3(v:v)混合，置4℃下沉淀12?h。

本發明中，所述離心都是以3500?r/min的轉速離心15?min。

本發明具有如下優點：

1、由于復合酶解法提取具有效率高，產品質量好，反應條件更加溫和等優點，而高壓提取又可將被提取物的組織細胞及亞細胞結構解體，使細胞內的化學成分與溶媒充分接觸得到直接溶解。本發明通過復合酶解和高壓熱水浸提相結合的方法提取金針菇中的多糖，提高了金針菇多糖的提取率。經本發明方法生產的金針菇多糖提取率可達12.18%。

2、本發明有效提高了原料利用率，且節約能源，工藝路線簡捷，設備投入少，是一種金針菇綜合加工利用的有效方法，易于生產和推廣，是一種金針菇綜合加工利用的有效方法。

附圖說明

圖1為苯酚-硫酸法的標準曲線；

圖2為DNS法的標準曲線；

圖3為不同方法提取金針菇多糖得率的比較。

具體實施方式

下面對本發明的技術方案作進一步的說明，但并不局限于此，凡是對本發明技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的精神和范圍，均應涵蓋在本發明的保護范圍中。

本發明提供了一種復合酶協同高壓熱水浸提法提取金針菇多糖的方法，具體內容如下：

1、材料與方法

1.1試驗材料