[發(fā)明專(zhuān)利]少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽前體蛋白Ssm-A及其產(chǎn)物Ssm-A1和Ssm-A2的制備和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410631742.4
• 申請(qǐng)日: 2014-11-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104356218A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張?jiān)?/a>;李文輝;楊新旺;張悅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/435
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/435;A61K38/17;A61P29/00
• 代理公司: 昆明今威專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 53115
• 代理人: 賽曉剛

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽前體蛋白Ssm-A及其產(chǎn)物Ssm-A1和Ssm-A2的制備和應(yīng)用,屬生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

蜈蚣是一味傳統(tǒng)的重要?jiǎng)游锼幉模渲兴幩幱靡延?千多年的歷史。蜈蚣性溫，有毒，入肝經(jīng)。辛溫燥烈，走竄性猛，行表達(dá)里，無(wú)所不至，能搜風(fēng)通絡(luò)定驚，開(kāi)痰行滯，解瘀定驚；亦能熄風(fēng)定痛。解毒散結(jié)、活血化瘀通絡(luò)，補(bǔ)虛興陽(yáng)起痿，祛濕散邪解毒，為單用或復(fù)方中要藥(楊媚月等,2012蜈蚣外用的現(xiàn)狀與展望,中成藥，第34卷,第7期,1343-1346.)。我國(guó)藥典中記載的少棘蜈蚣(Scolopendra?subspinipes?multilans)的功能與主治為：息風(fēng)鎮(zhèn)痙，通絡(luò)止痛，攻毒散結(jié)。用于肝風(fēng)內(nèi)動(dòng)，痙攣抽搐，小兒驚風(fēng)，中風(fēng)口喁，半身不遂，破傷風(fēng)，風(fēng)濕頑痹，偏正頭痛，瘡瘍，瘰疬，蛇蟲(chóng)咬傷(國(guó)家藥典委員會(huì)，2010中國(guó)藥典(一部)，北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，335-336頁(yè))。

少棘蜈蚣粗毒中有磷酸酶A、蛋白水解酶、乙酰膽堿酯酶、精氨酸酯酶、類(lèi)凝血酶、纖維素酶、α-淀粉酶、透明質(zhì)酸酶、堿性磷酸酶和酸性磷酸酶等10種酶,還有羥肽酶、ATP酶、核苷酸焦磷酸酶、氨基酸萘胺酶、精氨酸酯酶等(陶勇,2000蜈蚣毒的研究進(jìn)展,中國(guó)生化藥物雜志,第21卷，第2期，94-95頁(yè))。隨著對(duì)疼痛相關(guān)分子生物學(xué)的日益深入，揭示了離子通道在疼痛的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。近年來(lái)，少棘蜈蚣中作用于Na⁺，K⁺，Ca²⁺等離子通道的成分研究有了長(zhǎng)足的進(jìn)展，在一定程度上闡明了少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛的分子基礎(chǔ)(Yang?et?al,2012Chemical?punch?packed?in?venoms?makes?centipedes?excellent?predators,Mol?Cell?Proteomics,11:640-650；Chen?et?al,2014Isolation?and?characterization?of?SsmTx-I,a?Specific?Kv2.1blocker?from?the?venom?of?the?centipede?Scolopendra?Subspinipes?Mutilans?L.Koch,J?Pept?Sci.20:159-164)。但少棘蜈蚣中與其臨床通絡(luò)止痛功效相關(guān)的物質(zhì)基礎(chǔ)研究仍顯不足。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽前體蛋白Ssm-A及其產(chǎn)物Ssm-A1和Ssm-A2的制備方法。由于少棘蜈蚣毒腺對(duì)前體蛋白Ssm-A翻譯后加工的差異，產(chǎn)生了Ssm-A1和Ssm-A2的天然鎮(zhèn)痛肽。Ssm-A1和Ssm-A2的區(qū)別在于Ssm-A1比Ssm-A2在小肽的N-端多出了Asn?Ser?Lys?Tyr?4個(gè)氨基酸殘基。Ssm-A1和Ssm-A2具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、可通過(guò)少棘蜈蚣粗毒分離純化得到的有益特點(diǎn)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽Ssm-A1和Ssm-A2的應(yīng)用，Ssm-A1和Ssm-A2均具有鎮(zhèn)痛活性強(qiáng)的有益特點(diǎn)，可應(yīng)用于疼痛治療藥物的制備。

本發(fā)明涉及的少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽Ssm-A1和Ssm-A2，是從國(guó)產(chǎn)少棘蜈蚣毒液中分離得到的，少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽Ssm-A1的氨基酸序列如下(SEQ?ID?NO:2)：

少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽Ssm-A2的氨基酸序列如下(SEQ?ID?NO:3)：

本發(fā)明提供的少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽Ssm-A1和Ssm-A2，其制備方法可以通過(guò)生物化學(xué)分離純化方法，由少棘蜈蚣粗毒中得到。上述方法制備的少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽Ssm-A1和Ssm-A2可通過(guò)質(zhì)譜及鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行鑒定。

少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽Ssm-A1和Ssm-A2的制備也可通過(guò)本領(lǐng)域常規(guī)的方法，采用化學(xué)合成或基因表達(dá)的方式得到，它們的氨基酸序列與本發(fā)明SEQ?ID?NO:2和SEQ?ID?NO:3相同。

上面所述少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽Ssm-A1和Ssm-A2的應(yīng)用，所述鎮(zhèn)痛肽Ssm-A1和Ssm-A2在臨床治療上的應(yīng)用。

下面以制備的具有SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2所示氨基酸序列的少棘蜈蚣鎮(zhèn)痛肽Ssm-A1和Ssm-A2為例來(lái)進(jìn)行說(shuō)明：

Ssm-A1(SEQ?ID?NO:2)：

Ssm-A2(SEQ?ID?NO:3)：