[發明專利]一種利用大氣壓冷等離子體射流轉染外源核酸的方法有效
| 申請號： | 201410628429.5 | 申請日： | 2014-11-10 |
| 公開（公告）號： | CN104372028A | 公開（公告）日： | 2015-02-25 |
| 發明（設計）人： | 許德暉;楊延潔;王碧菁;孔剛玉 | 申請（專利權）人： | 西安交通大學 |
| 主分類號： | C12N15/87 | 分類號： | C12N15/87 |
| 代理公司： | 西安通大專利代理有限責任公司 61200 | 代理人： | 陸萬壽 |
| 地址： | 710049 陜*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 大氣壓 等離子體 射流 轉染 核酸 方法 | ||
1.一種利用大氣壓冷等離子體射流轉染外源核酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)將待轉染的細胞計數并種植在多孔細胞培養板中，加入培養液，得到待轉染的細胞液；
2)調試等離子體射流源設備，并連接氣體流量計，使石英管底部距離待轉染的細胞液液面1～2cm，通入基礎氣體，待氣流穩定后，施加正弦高壓電壓，調整電源頻率為5～20kHz，電壓為7～14kv，穩定電壓直至藍紫色等離子體氣流從石英管底部吹出；
3)將待轉染的細胞放置在等離子體射流源正下方處理5～60s后，移開細胞，并加入待轉染的外源核酸，混勻后放回培養箱繼續培養。
2.根據權利要求1所述的一種利用大氣壓冷等離子體射流轉染外源核酸的方法，其特征在于，步驟1)所述的多孔細胞培養板為24孔板，且每孔加入的細胞個數為5×105個。
3.根據權利要求2所述的一種利用大氣壓冷等離子體射流轉染外源核酸的方法，其特征在于，步驟1)所述的培養液為RPMI1640，且每孔加入300uL培養液RPMI1640。
4.根據權利要求1所述的一種利用大氣壓冷等離子體射流轉染外源核酸的方法，其特征在于，步驟2)所述的基礎氣體為氦氣或者氬氣，且調節該基礎氣體的氣流量為2SLM。
5.根據權利要求1～4中任意一項所述的一種利用大氣壓冷等離子體射流轉染外源核酸的方法，其特征在于，所述步驟2)在通入基礎氣體時還通入氧氣、氮氣或水蒸氣作為輔助氣體。
6.根據權利要求5所述的一種利用大氣壓冷等離子體射流轉染外源核酸的方法，其特征在于，調節所述輔助氣體的氣流量為20SSLM。
7.根據權利要求1所述的一種利用大氣壓冷等離子體射流轉染外源核酸的方法，其特征在于，所述的待轉染的細胞包括腫瘤細胞及正常細胞；
所述腫瘤細胞為骨髓瘤細胞LP、肺癌細胞A549、肝癌細胞SMCC7721、肝癌細胞HepG2、乳腺癌細胞MCF-7或黑素瘤細胞A375；
所述正常細胞為基質細胞MSC、皮膚上皮細胞Hacat或肝細胞LO2。
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