[發明專利]一種融合蛋白分子量分析方法有效

申請號：	201410625245.3	申請日：	2014-11-07
公開（公告）號：	CN105628927B	公開（公告）日：	2020-04-24
發明（設計）人：	呂鋒華;劉周陽;環民霞;黃黎明;譚青喬	申請（專利權）人：	三生國健藥業（上海）股份有限公司
主分類號：	G01N33/68	分類號：	G01N33/68
代理公司：	暫無信息	代理人：	暫無信息
地址：	201203 上海市浦***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種融合蛋白分子量分析方法
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【權利要求書】：

1.一種含O-糖核心的融合蛋白分子量分析方法，其特征在于，所述方法由以下步驟組成：

(1)融合蛋白N-糖去除，

(2)融合蛋白唾液酸去除，

(3)對去除N-糖和唾液酸的融合蛋白進行分子量分析；

其中，上述步驟(1)和(2)順序可以互換，融合蛋白N-糖去除時溶液pH值為7.0～8.0，所述融合蛋白N-糖去除通過以下方法實現：取融合蛋白樣品，加入NH₄HCO₃或1％NH₃.H₂O調節pH值至7.0～8.0，加入肽N-糖苷酶，混勻后，37℃孵育24小時，融合蛋白唾液酸去除時溶液pH值為4.0～7.0，所述融合蛋白唾液酸去除通過以下方法實現：取融合蛋白樣品，加入NH₄HCO₃或1％甲酸調節pH值至4.0～7.0，加入唾液酸酶，37℃孵育24小時，所述融合蛋白是Etanercept或rhCTLA4-Ig，所述融合蛋白的分子量是通過ESI-Q-TOF MS方法進行分析獲得。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述ESI-Q-TOF MS分析包括步驟：將融合蛋白用50mM pH8.0的NH₄HCO₃溶液稀釋至1mg/mL；然后脫鹽柱脫鹽；最后進行質譜分析。

3.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述pH值是通過酸性或堿性可揮發性溶液調節。

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