[發(fā)明專利]用于增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光的增強(qiáng)液及制備化學(xué)發(fā)光液的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410617881.1
• 申請(qǐng)日: 2014-11-05
• 公開（公告）號(hào): CN104597233A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任琪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市美凱特科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/531
• 分類號(hào): G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44248
• 代理人: 張英;譚果林

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光的增強(qiáng)液及制備化學(xué)發(fā)光液的方法。

背景技術(shù)

化學(xué)發(fā)光作為國(guó)外近年快速發(fā)展且廣泛使用的免疫分析技術(shù)，它具有高靈敏度，檢測(cè)線性范圍寬和無(wú)污染等特點(diǎn)。目前化學(xué)發(fā)光免疫分析中主要有魯米諾，異魯米諾，吖啶和環(huán)二氧乙烷衍生物(如CSPD,CDP-SATR,AMPPD等)等系統(tǒng)。吖啶和異魯米諾直接標(biāo)記示蹤屬于直接化學(xué)發(fā)光。魯米諾和環(huán)二氧乙烷衍生物(如CSPD,CDP-SATR,AMPPD等)屬于酶促類化學(xué)發(fā)光。CSPD,CDP-SATR,AMPPD及其增強(qiáng)液多為進(jìn)口產(chǎn)品價(jià)格昂貴。

美國(guó)專利5145772公開了聚乙烯芐基二甲基芐基氯化銨形成膠束對(duì)環(huán)二氧乙烷化合物的發(fā)光增強(qiáng)效果。美國(guó)專利US5547836公開了聚乙烯芐基三甲基氯化銨可對(duì)環(huán)二氧乙烷化合物發(fā)光增強(qiáng)。中國(guó)專利CN1719254A公開了一CSPD為底物，十六烷基三甲基氯化銨，BSA，十八烷基熒光素，肉蔻酰甘油磷酸二鈉為增強(qiáng)液的發(fā)光液，但其成本高，制備復(fù)雜，不利于廣泛應(yīng)用

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出一種的用于新型環(huán)二氧乙烷化合物化學(xué)發(fā)光底物A的增強(qiáng)液,包含至少一種化學(xué)發(fā)光法底物：N-烷基二甲基甘露糖胺季銨鹽，R為8-40烷基或8-40烯基,Y為負(fù)離子，其結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，其優(yōu)點(diǎn)在于，該增強(qiáng)液用于免疫檢測(cè)領(lǐng)域，提高了檢測(cè)靈敏度高和線性范圍，降低了成本低，且無(wú)污染。解決了以往試劑依賴進(jìn)口，價(jià)格昂貴，且不能達(dá)到最佳發(fā)光性能等問題。

優(yōu)選的，所述N-烷基二甲基甘露糖胺季銨鹽采用N-十二烷基二甲基甘露糖胺氯化銨，N-十四烷基二甲基甘露糖胺氯化銨，N-十六烷基二甲基甘露糖胺氯化銨，N-十八烷基二甲基甘露糖胺氯化銨，N-十二烷基二甲基甘露糖胺溴化銨，N-十四烷基二甲基甘露糖胺溴化銨，N-十六烷基二甲基甘露糖胺溴化銨和N-十八烷基二甲基甘露糖胺溴化銨中的至少一種。

優(yōu)選的，還包括：1-50mg/L吖啶橙、1-100g/L?BSA、1-10g/L甘氨酸、0.1-0.5mol/L葡萄糖甲胺、0.1-10mmol/L氯化鎂或者乙酸鎂、0.1-10mmol/L氯化鋅。

優(yōu)選的，葡萄糖甲胺pH＝8.5。

本發(fā)明還提供一種采用該增強(qiáng)液制備化學(xué)發(fā)光液的方法，包括以下幾個(gè)步驟：

步驟A:將葡萄糖甲胺溶解于水中調(diào)節(jié)pH至8至9,再將N-烷基二甲基甘露糖胺季銨鹽、吖啶橙、BSA、甘氨酸、MgCl₂、ZnCl₂分別加入至二乙醇胺溶液中，攪拌溶解，定容，得至增強(qiáng)液；

步驟B:用增強(qiáng)液將化學(xué)發(fā)光底物稀釋得到化學(xué)發(fā)光液。

優(yōu)選的，化學(xué)發(fā)光底物采用環(huán)二氧乙烷化合物化學(xué)發(fā)光底物。

優(yōu)選的，化學(xué)發(fā)光底物采用9-[3-(5-氯-2-螺旋金剛烷)-1,2二氧環(huán)乙烷]-3-氯-7-磷氧酰基-10-丙酸基-9，10二氫化吖啶二鈉鹽，其結(jié)構(gòu)式為：

本發(fā)明的有益效果是：

1：與市售增強(qiáng)液相比提高了新型環(huán)二氧乙烷化合物化學(xué)發(fā)光法底物的發(fā)光液的穩(wěn)定性

2：與市售增強(qiáng)液相比提高了新型環(huán)二氧乙烷化合物化學(xué)發(fā)光法底物的發(fā)光液的性能

3：相比市售CDP-STAR+Emerald-II^TM發(fā)光液發(fā)光性信號(hào)著提高。

4：相比市售CDP-STAR+Emerald-II^TM發(fā)光液檢測(cè)時(shí)間明顯縮短。

5：相對(duì)進(jìn)口化學(xué)發(fā)光液和增強(qiáng)劑更為經(jīng)濟(jì)，新型化學(xué)發(fā)光底物化合物產(chǎn)品靈敏度高，穩(wěn)定性好，價(jià)格低。

附圖說(shuō)明

圖1是實(shí)施例1中，將10ul?2*10^-16mol的堿性磷酸酶作為樣品加入微孔板中，然?后加入100ul化學(xué)發(fā)光液1，在化學(xué)發(fā)光儀(BIOTEK-Synergy2)上記錄發(fā)光信號(hào),檢測(cè)其發(fā)光動(dòng)力學(xué)曲線。

圖2是實(shí)施例1中，將10ul?2*10^-16mol的堿性磷酸酶作為樣品加入微孔板中，然后加入100ul化學(xué)發(fā)光液2，在化學(xué)發(fā)光儀(BIOTEK-Synergy2)上記錄發(fā)光信號(hào),檢測(cè)其發(fā)光動(dòng)力學(xué)曲線。