[發(fā)明專利]一種鹿脾提取物提取方法及在提高免疫力藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410614548.5
• 申請日: 2014-11-05
• 公開（公告）號: CN104306399B
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 滕利榮;彭小君;蔡廣勝;賈東旭;權(quán)宇彤;孟慶繁;逯家輝;王迪;滕樂生;王貞佐;謝晶;程瑛琨
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林省東鰲鹿業(yè)科技開發(fā)有限公司
• 主分類號: A61K35/26
• 分類號: A61K35/26;A61P37/04;A23L33/00;A23L33/18
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責(zé)任公司22201
• 代理人: 姜姍姍

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明公開一種鹿脾提取物提取方法，本發(fā)明還進(jìn)一步提供了鹿脾提取物在提高免疫力藥物中的應(yīng)用，屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域。

技術(shù)背景：

鹿脾是鹿科動物梅花鹿或馬鹿的脾。中國歷代醫(yī)學(xué)家認(rèn)為，鹿為仙獸，純陽多壽之物，全身皆益于人。鹿制品均具有極高的藥用價值和保健功效。從脾中提取多肽或核酸等小分子，又名轉(zhuǎn)移因子，具有減輕或消除癌癥人化療、放療引起的毒副作用等功能，主要應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。

轉(zhuǎn)移因子是由T淋巴細(xì)胞所釋放的一類可透析的小分子多肽和核苷酸復(fù)合物，具有增強淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，從而提高機體免疫功能的作用。目前，轉(zhuǎn)移因子的提取方法多為勻漿、凍融、透析等物理方法提取轉(zhuǎn)移因子，但物理方法的提取率非常低。

隨著生物技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)移因子的提取方法逐漸改進(jìn)，有專利《一種鹿脾提取物制劑及其制備方法》專利號ZL201210171730.9，對鹿脾提取通過加入胃蛋白酶、胰蛋白酶或中性蛋白酶進(jìn)行酶解，提取物中核酸的提取率仍然極低，由于其選用的蛋白酶僅能酶解鹿脾中部分蛋白，酶解的能力有限，提取的有效多肽提取率也較低。

5’-磷酸二酯酶是一種能將單鏈DNA和RNA水解為5’-核苷酸的磷酸二酯酶，一般用于分析主基因組、雙鏈環(huán)形DNA質(zhì)粒或類質(zhì)粒結(jié)構(gòu)等分子生物學(xué)領(lǐng)域，或者用于5’-核苷酸生產(chǎn)；本發(fā)明首次將其應(yīng)用在生物鹿脾的提取工藝，其與木瓜蛋白酶和中性蛋白酶具有協(xié)同作用，可以同時提高多肽和核糖的提取率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明公開了鹿脾提取物在提高免疫力藥物中的用途，可用于制備提高免疫力作用的藥物和保健食品，在劑型方面可采用各種劑型，如口服液、片劑、顆粒劑、散劑、丸劑、膠囊等劑型或緩釋制劑。

本發(fā)明進(jìn)一步公開了一種鹿脾提取物的制備方法，為一種新的制備方法，提高了多肽和核糖的提取率。

本發(fā)明公開的一種鹿脾提取物的制備方法，包括以下步驟：

1）稱取鹿脾200份，去除表面結(jié)締組織；

2）加入2:1~5:1倍重量的去離子水或生理鹽水，膠體磨等高速剪切機研磨2~10min；

3）將鹿脾混懸液升溫至65~70℃，調(diào)pH值至5~6，加入2~7%重量的復(fù)合酶酶解，保溫2~3h；

4）將混懸液用4000g離心力下離心10min取上清，用10KD超濾膜進(jìn)行超濾得超濾液，噴霧干燥即得具有提高免疫力功能的鹿脾提取物粉末。

所述的復(fù)合酶為木瓜蛋白酶：菠蘿蛋白酶：5’-磷酸二酯酶的質(zhì)量比為1~2.5：1~2：2~5；

所述的木瓜蛋白酶活力為800U/g，菠蘿蛋白酶活力為50000U/g，5’-磷酸二酯酶酶活力為800U/g。

所述的鹿脾提取物中含 15~30重量份多肽、1.0~2.7 重量份核酸。

本發(fā)明的積極效果在于：采用木瓜蛋白酶：菠蘿蛋白酶：5’-磷酸二酯酶制成的復(fù)合酶對鹿脾進(jìn)行酶解，具有協(xié)同作用，相比于單個酶提取多肽提取率提高了90%，核酸提取率提高了75%；相比于專利ZL201210171730.9提取方法，多肽和核酸提取率有顯著提高。同時采用本發(fā)明方法得到的鹿脾提取物的增強免疫力作用顯著高于專利ZL201210171730.9的鹿脾提取物。

具體實施方式：

以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，以下實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限定本發(fā)明的范圍，對照例1和2再現(xiàn)專利ZL201210171730.9提取工藝。

實施例1：

. 稱取鹿脾200g，去除表面結(jié)締組織；

. 加入400ml生理鹽水，膠體磨等高速剪切機研磨5min；

. 將鹿脾混懸液升溫至70℃，調(diào)pH值至6.0，加入4.8g木瓜蛋白酶，2.4g菠蘿蛋白酶和5.0g 5'-磷酸二酯酶酶解保溫2h；

. 將混懸液用4000g離心力下離心10min取上清，用10KD超濾膜進(jìn)行超濾得超濾液，噴霧干燥即得具有提高免疫力功能的鹿脾提取物粉末。本次提取多肽提取率為12.67%，核酸提取率為1.79%。

實施例2：

. 稱取鹿脾200g，去除表面結(jié)締組織；

. 加入600ml生理鹽水，膠體磨等高速剪切機研磨2min；

. 將鹿脾混懸液升溫至65℃，調(diào)pH值至5.5，加入2.5g木瓜蛋白酶，2.5g菠蘿蛋白酶和5.0g 5'-磷酸二酯酶酶解保溫2h；