[發(fā)明專利]A型流感病毒H1亞型檢測方法及其試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410612019.1
• 申請日: 2014-11-03
• 公開（公告）號: CN104407134A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬嵐;吳峰;秦智鋒;盧體康
• 申請（專利權(quán)）人: 清華大學(xué)深圳研究生院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及病毒檢測領(lǐng)域，特別地，本發(fā)明涉及A型流感病毒H1亞型的檢測方法及其試劑盒，特別地，本發(fā)明涉及一種試劑盒、試劑盒在檢測A型流感病毒H1亞型中的用途以及一種檢測A型流感病毒H1亞型的方法。

背景技術(shù)

A型流感病毒即甲型流感病毒為常見流感病毒，甲型流感病毒容易發(fā)生變異，其亞型常被人們稱為“禽流感”。禽流感是嚴重危害世界養(yǎng)禽業(yè)的毀滅性疫病，其病原容易突變，具有多個血清型，給該病的防控帶來困難，病毒基因變異后能夠感染人類，感染后的癥狀主要表現(xiàn)為高熱、咳嗽、流涕、肌痛等，多數(shù)伴有嚴重的肺炎，嚴重者心、腎等多種臟器衰竭導(dǎo)致死亡。A型流感病毒H1亞型是人類最常感染的流感病毒之一,自2009年3月墨西哥爆發(fā)H1N1疫潮以來，已經(jīng)造成全球范圍內(nèi)數(shù)萬人死亡。

目前常見的A型流感病毒H1亞型的檢測方法主要有：核酸檢測和病毒分離鑒定。核酸檢測有RT-PCR檢測和real-time?RT-PCR檢測方法，核酸檢測依賴于樣本模板RNA的質(zhì)與量，操作要求嚴格，需要大量儀器與設(shè)備及專業(yè)人員操作，檢測時間較長，檢測靈敏度高。病毒分離鑒定常用于對陽性樣品病毒的亞型鑒定，需要專門實驗室才能進行。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決上述技術(shù)問題之一或至少提供一種有用的商業(yè)選擇。

為此，依據(jù)本發(fā)明的一方面，提供一種試劑盒，其包括第一包被膜和第二包被膜，所述第一包被膜的一端與所述第二包被膜的一端相連，所述第一包被膜中的至少一塊區(qū)域包被有帶熒光標(biāo)記的第一抗體，所述第二包被膜包含分離的第一區(qū)域和第二區(qū)域，所述第一區(qū)域比所述第二區(qū)域靠近所述第一包被膜，所述第一區(qū)域包被有第二抗體，所述第二抗體和所述第一抗體能夠特異性結(jié)合同一種抗原，所述第二區(qū)域包被有抗抗體，所述抗抗體能夠特異性結(jié)合所述第一抗體。對第一包被膜中的包被有熒光標(biāo)記第一抗體的區(qū)域的大小不作限制，可以是整個第一包被膜，也可以是第一包被膜的一部分，在本發(fā)明的一個實施例中第一包被膜被稱為樣品墊。同樣的，對第二包被膜中的分離的第一區(qū)域和第二區(qū)域各自的大小也不作特別限制，在本發(fā)明的一個實施例中，如圖1所示，試劑盒的第一包被膜和第二包被膜都是長方形的，第一包被膜的一條寬邊和第二包被膜的一條寬邊相粘，第一包被膜中的包被有熒光標(biāo)記第一抗體的區(qū)域為長約2cm、寬約3mm的長方形，第二包被膜中的第一區(qū)域和第二區(qū)域都為線狀，第一區(qū)域被稱為檢測線(T線)，第二區(qū)域被稱為質(zhì)控線(C線)，兩個區(qū)域所在的線狀平面都平行于兩包被膜的粘結(jié)邊，所說的線狀第一或第二區(qū)域的寬度大約為0.5-1mm、長為膜的寬。

本發(fā)明的這一試劑盒利用第一膜和第二膜分別包被有能特異性結(jié)合同一種抗原的熒光標(biāo)記的第一抗體和第二抗體，加入待測樣品后利用膜層析，在第二膜上形成雙抗體夾心復(fù)合物，基于檢測復(fù)合物中的第一抗體上帶的熒光標(biāo)記的熒光強度來判斷樣品中是否存在所說的抗原。本發(fā)明的這一試劑盒能夠明顯的提高檢測的特異性，縮短檢測所需時間。通過熒光標(biāo)記第一抗體，能夠明顯的提高檢測靈敏度。

根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，本發(fā)明的這一方面的試劑盒中的第二包被膜的另一端連接有吸水墊。吸水墊可為強吸水物質(zhì)，這樣在檢測液態(tài)樣品時能夠給予定向作用力使液態(tài)樣品從第一包被膜定向?qū)游鲋恋诙荒ぁ?/p>

根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，所述第一包被膜、所述第二包被膜和所述吸水墊固定在同一固相基質(zhì)上。固相基質(zhì)主要為在使用本發(fā)明的這一試劑盒時有個承載，方便操作，固相基質(zhì)的類型不作特別限定，可以為不會與待測樣品發(fā)生反應(yīng)或者不影響抗原抗體結(jié)合的惰性材料，比如紙板、塑料板等。

根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，所述第一包被膜為玻璃纖維素膜，所述第二包被膜為硝酸纖維素膜(NC膜)。玻璃纖維膜呈化學(xué)惰性，不含粘合劑，采用100％硼硅酸玻璃纖維制造而成，其上包被有熒光標(biāo)記的第一抗體，利于第一抗體與待測樣品中的目標(biāo)抗原發(fā)生特異性結(jié)合。而NC膜本身是已經(jīng)添加了表面活性劑來改善親水能力，而且已經(jīng)存在有一定的緩沖系統(tǒng)，具有毛細纖維結(jié)構(gòu)，能吸附比同等纖維素濾紙更多的水分，流速快，耐高溫，利于其上包被的第二抗體與前述的熒光標(biāo)記第一抗體-抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，激發(fā)熒光。