[發(fā)明專利]一種轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201410609976.9
• 申請日: 2014-11-04
• 公開（公告）號: CN104450678A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉曼;逄淑梅;牟特
• 申請（專利權(quán)）人: 青島康大分析檢測有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，是一種適用于PCR擴(kuò)增的轉(zhuǎn)基因大豆油DNA的提取方法。

背景技術(shù)

目前從轉(zhuǎn)基因大豆被批準(zhǔn)種植以后，世界上每年的種植面積都在增加，至今已增加到5000多萬公頃，并且還有增加的趨勢。中國是轉(zhuǎn)基因大豆的主要進(jìn)口國家之一。進(jìn)口轉(zhuǎn)基因大豆多用于提取大豆油，因此大豆油轉(zhuǎn)基因檢測十分重要。2002年我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)識管理辦法》及衛(wèi)生部出臺的《轉(zhuǎn)基因食品衛(wèi)生管理辦法》規(guī)定，包括大豆、玉米、油菜、棉花、番茄5類17種產(chǎn)品以及以轉(zhuǎn)基因動植物、微生物或者其直接加工品為原料生產(chǎn)的食品和食品添加劑必須進(jìn)行標(biāo)識。除此之外，實用植物油的核酸檢測技術(shù)在植物油原料成分鑒定、摻假食用油的鑒定領(lǐng)域的需求也日顯突出。人們?nèi)粘Ｊ秤玫拇蠖褂投酁榫珶挻蠖褂?，在得到粗油后又?jīng)較為復(fù)雜的精煉過程，僅沉降和脫膠兩個步驟就除去大豆粗油中大部分的DNA，DNA提取非常困難，導(dǎo)致后續(xù)的轉(zhuǎn)基因檢測很難實現(xiàn)。高質(zhì)量DNA模板的獲取，是轉(zhuǎn)基因大豆油進(jìn)行檢測的前提，因此，研究精煉大豆油中DNA的提取方法，不僅對實施食品標(biāo)簽和標(biāo)識，保護(hù)消費(fèi)者的知情權(quán)和選擇權(quán)具有重要意義，同時對食用油脂的摻假檢測也具有重要的參考意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是建立一種方便、簡單的轉(zhuǎn)基因大豆油DNA的提取方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法，首先將轉(zhuǎn)基因大豆油與TE溶液混合，磁力攪拌器攪拌2h乳化，12000r/min離心20min，小心取出下層水相；加入等體積的異丙醇，混勻，常溫靜置30min，12000r/min離心15min，去上清保留沉淀；加入TE溶解沉淀，加入2/3體積的氯仿：異戊醇進(jìn)行抽提，12000r離心15min，取出上清，加入等體積異丙醇沉淀10min，離心10min，倒掉上清；用無水乙醇洗滌沉淀；沉淀常溫干燥后，用50ulTE溶液溶解，即得到轉(zhuǎn)基因大豆油的DNA溶液。

本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法的有益效果是：可以從轉(zhuǎn)基因大豆油中提取到高質(zhì)量的適宜于PCR檢測的基因組DNA，操作簡單、耗時短、利于快速檢測。?

具體實施方式

本發(fā)明的一種轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法，包括以下步驟：

（1）取30ml轉(zhuǎn)基因大豆油，加入12mlTE溶液，置于磁力攪拌器上攪拌2h，充分乳化；

（2）將乳化的大豆油放入45ml離心管中12000r，離心20min；

（3）小心去掉上層油相，取水相，加入等體積的異丙醇常溫靜置30min；

（4）12000r/min離心15min，小心倒掉上層液體，留沉淀；

（5）加入1ml?TE溶液溶解沉淀；

（6）加入2/3體積的氯仿：異戊醇進(jìn)行抽提，氯仿：異戊醇體積比為24:1；

（7）12000r，離心15min，取上清，加入等體積的異丙醇，沉淀10min；

（8）12000r離心10min，棄上清，留沉淀；

（9）用預(yù)冷的無水乙醇洗滌沉淀，12000r離心1min；

（10）沉淀在室溫干燥，用50ul?TE溶液溶解，-20℃貯存?zhèn)溆谩?!-- SIPO -->