[發明專利]一種轉基因大豆油DNA提取方法

在審

• 申請號: 201410609976.9
• 申請日: 2014-11-04
• 公開（公告）號: CN104450678A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 劉曼;逄淑梅;牟特
• 申請（專利權）人: 青島康大分析檢測有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

技術領域

本發明屬于生物技術領域，是一種適用于PCR擴增的轉基因大豆油DNA的提取方法。

背景技術

目前從轉基因大豆被批準種植以后，世界上每年的種植面積都在增加，至今已增加到5000多萬公頃，并且還有增加的趨勢。中國是轉基因大豆的主要進口國家之一。進口轉基因大豆多用于提取大豆油，因此大豆油轉基因檢測十分重要。2002年我國農業部發布的《轉基因生物標識管理辦法》及衛生部出臺的《轉基因食品衛生管理辦法》規定，包括大豆、玉米、油菜、棉花、番茄5類17種產品以及以轉基因動植物、微生物或者其直接加工品為原料生產的食品和食品添加劑必須進行標識。除此之外，實用植物油的核酸檢測技術在植物油原料成分鑒定、摻假食用油的鑒定領域的需求也日顯突出。人們日常食用的大豆油多為精煉大豆油，在得到粗油后又經較為復雜的精煉過程，僅沉降和脫膠兩個步驟就除去大豆粗油中大部分的DNA，DNA提取非常困難，導致后續的轉基因檢測很難實現。高質量DNA模板的獲取，是轉基因大豆油進行檢測的前提，因此，研究精煉大豆油中DNA的提取方法，不僅對實施食品標簽和標識，保護消費者的知情權和選擇權具有重要意義，同時對食用油脂的摻假檢測也具有重要的參考意義。

發明內容

本發明的目的是建立一種方便、簡單的轉基因大豆油DNA的提取方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種轉基因大豆油DNA提取方法，首先將轉基因大豆油與TE溶液混合，磁力攪拌器攪拌2h乳化，12000r/min離心20min，小心取出下層水相；加入等體積的異丙醇，混勻，常溫靜置30min，12000r/min離心15min，去上清保留沉淀；加入TE溶解沉淀，加入2/3體積的氯仿：異戊醇進行抽提，12000r離心15min，取出上清，加入等體積異丙醇沉淀10min，離心10min，倒掉上清；用無水乙醇洗滌沉淀；沉淀常溫干燥后，用50ulTE溶液溶解，即得到轉基因大豆油的DNA溶液。

本發明的轉基因大豆油DNA提取方法的有益效果是：可以從轉基因大豆油中提取到高質量的適宜于PCR檢測的基因組DNA，操作簡單、耗時短、利于快速檢測。?

具體實施方式

本發明的一種轉基因大豆油DNA提取方法，包括以下步驟：

（1）取30ml轉基因大豆油，加入12mlTE溶液，置于磁力攪拌器上攪拌2h，充分乳化；

（2）將乳化的大豆油放入45ml離心管中12000r，離心20min；

（3）小心去掉上層油相，取水相，加入等體積的異丙醇常溫靜置30min；

（4）12000r/min離心15min，小心倒掉上層液體，留沉淀；

（5）加入1ml?TE溶液溶解沉淀；

（6）加入2/3體積的氯仿：異戊醇進行抽提，氯仿：異戊醇體積比為24:1；

（7）12000r，離心15min，取上清，加入等體積的異丙醇，沉淀10min；

（8）12000r離心10min，棄上清，留沉淀；

（9）用預冷的無水乙醇洗滌沉淀，12000r離心1min；

（10）沉淀在室溫干燥，用50ul?TE溶液溶解，-20℃貯存備用。