[發明專利]一種大豆DNA的提取方法

在審

• 申請號: 201410609628.1
• 申請日: 2014-11-04
• 公開（公告）號: CN104450677A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 劉曼;逄淑梅;牟特
• 申請（專利權）人: 青島康大分析檢測有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種大豆DNA的提取方法。

背景技術

大豆是我國乃至全世界重要的經濟與糧食作物，是食用油和植物蛋白最豐富、最廉價的來源。為了提高大豆的產量，滿足人們對大豆的需求量，科研人員采用基因工程與分子輔助育種方法，培育了一些高產、優質和抗逆以及適合農場機械化種植的轉基因大豆品種。2010年國際農業生物技術應用服務組織(ISAAA)的數據顯示：2010年轉基因大豆仍然是最主要的轉基因作物，種植面積約7330萬公頃，占全球轉基因作物種植面積的50%左右。中國從上世紀末開始進口耐除草劑轉基因大豆，各種與轉基因大豆相關的產品越來越多地進入市場。為保障廣大消費者的知情權和選擇權，滿足國際貿易的需要，建立準確、快速、高效的轉基因成分檢測技術至關重要。核酸檢測技術，尤其是常規聚合酶鏈式反應(PCR)和實時熒光PCR法，核酸檢測的關鍵因素是提取到高質量的DNA。在做PCR試驗時，首先面臨的一個問題即是模板DNA的提取。對于大豆來說，一般實驗室都是利用幼苗葉片為材料，經液氮研磨提取DNA。此過程必須要經過浸種催芽、幼苗培養、液氮研磨等過程，一般要用兩周左右的時間才能進行DNA的提取并進一步開展實驗。常規提取方法耗費時間長，步驟繁瑣，并且提取的DNA純度不高，質量差等。

發明內容

本發明的目的是建立簡單、高效、穩定的一種提取大豆DNA的方法。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：一種大豆DNA的提取方法，包括以下步驟:（1）首先將大豆粉碎成粉末狀，分別稱取0.1g制備好的樣品，加入到兩支2ml離心管中；（2）加入2%CTAB裂解緩沖液，震蕩混勻，65℃孵育30min。（3）加入酚：氯仿：異戊醇，震蕩均勻，12000r/min離心20min。（4）吸取上清液，放入1.5ml離心管中，加入氯仿：異戊醇，震蕩均勻，12000r/min離心15min。（5）吸取上清液，放入另一1.5ml離心管中，加入等體積的異丙醇，沉淀30min，12000r/min離心10min。（6）棄去上清，加入無水乙醇溶液洗滌，12000r/min,離心1min。（7）棄去上清，沉淀室溫干燥，加入50ul?TE溶液溶解沉淀。（8）加入5ulRNAse酶溶液，37℃孵育30min，-20℃貯存備用。

步驟（1）中所述的樣品為大豆干種子經粉碎后，直徑小于0.1mm的顆粒。

步驟（2）中2%CTAB裂解緩沖液的配方為：CTAB?4g、50mmolTris-HCL?PH8.0、0.7molNaCl、10mmolEDTA?PH8.0、20mmol?2-巰基乙醇。

本發明的大豆DNA的提取方法的有益效果是：可以從大豆干種子中提取到高質量的適宜于PCR檢測的基因組DNA，操作簡單、耗時短、利于快速檢測。用本發明的方法得到的DNA濃度為118.15ng/μl，OD₂₆₀/?OD₂₈₀的值為1.85。

具體實施方式

本發明的一種提取大豆干種子DNA方法，包括以下步驟：

（1）首先將大豆粉碎成粉末狀，達到直徑小于0.1mm的顆粒；分別稱取0.1g制備好的樣品，加入到兩支2ml離心管中；

（2）加入600ul?2%CTAB裂解緩沖液，震蕩混勻，65℃孵育30min；2%CTAB裂解緩沖液：CTAB?4g、50mmolTris-HCL?PH8.0、0.7molNaCl、10mmolEDTA?PH8.0、20mmol?2-巰基乙醇；

（3）加入500ul酚：氯仿：異戊醇，震蕩均勻，12000r/min離心20min，酚、氯仿、異戊醇的體積比為25:24:1；

（4）吸取上清液，放入1.5ml離心管中，加入250ul?氯仿：異戊醇，震蕩均勻，12000r/min離心15min；氯仿、異戊醇的體積比為24:1；

（5）吸取上清液，放入另一1.5ml離心管中，加入等體積的異丙醇，沉淀30min，12000r/min離心10min；

（6）棄去上清，加入無水乙醇溶液洗滌，12000r/min，離心1min；

（7）棄去上清，干燥，加入50ulTE溶液溶解沉淀；

（8）加入5ulRNAse酶溶液，37℃孵育30min；-20℃貯存備用。