[發明專利]氯胺酮核酸適體、檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201410609268.5
• 申請日: 2014-10-31
• 公開（公告）號: CN105624164B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 曾立波;張玉榮;胡小龍;陳連康;孫美琪
• 申請（專利權）人: 上海市刑事科學技術研究院
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/94
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;崔佳佳

本發明提供了氯胺酮核酸適體、檢測試劑盒及其應用。具體地，本發明人采用SELEX技術，基于特殊結構的ssDNA文庫，成功地篩選得到對氯胺酮有高親和力和特異性的核酸適體。本發明的適體可應用于現場快速、靈敏地檢測氯胺酮。

技術領域

本發明涉及生物技術領域和刑事鑒定技術領域。具體地，本發明涉及氯胺酮核酸適體、檢測試劑盒及其應用，尤其在在毒物檢測中的應用。

背景技術

氯胺酮[2-氯苯-2-甲基胺環己酮]是一種高效麻醉劑，服用后能產生“分離性幻覺”，因此在很多社交場合和性侵犯案件中成為很常見的濫用藥物。氯胺酮的分析檢測手段有很多也很成熟，包括GC–MS,LC–MS/MS。盡管目前這些方法都對氯胺酮的檢測有很好的靈敏性和特異性，但是都需要昂貴的儀器設備，不能快速、現場檢測氯胺酮。此外，現有的免疫檢測方法容易與美沙酮、美沙芬發生交叉反應。

近年來，現場快速檢測毒品的方法是以單克隆抗體為基礎，取得了良好的效果。但是，單抗的檢測仍然存在一定的局限性：

一，單抗來源于動物，因此，在制備單抗時會出現某些限制；如，某些毒品、毒物的毒性為動物無法忍受，還有某些免疫性很差的小分子都會給制備單抗帶來困難。

二，雜交瘤的制備僅限于大小鼠和兔子，大大限制了抗體的應用。不同來源的抗體應用于檢測，可能會發生非特異的結合所產生假陽性結果。

三，單克隆抗體的制備工作量較大，對某些稀有的抗體需要篩選大量的克隆，成本較昂貴。

四，抗體制備有自身的缺陷，細胞株必須凍藏，如凍藏不好極易發生意外細胞死亡。

五，通常擴增單克隆抗體是通過將雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內產生腹水，從腹水中純化抗體。但是，某些雜交瘤細胞很難產生腹水，限制了抗體的產生。

六，每批生產的抗體的表現都不同，免疫檢測試劑每一批新抗體都要重新調試。

七，抗體識別都是在生理條件下進行，抗體與抗原的結合動力學參數無法根據需要而改變。

最重要的是，氯胺酮代謝迅速，尿中的氯胺酮原體含量很低，要求高度靈敏的檢測，而這些抗體無法實現。

綜上，本領域尚缺乏令人滿意的高靈敏度的、可適用現場檢測的氯胺酮的檢測方法，因此迫切需要研制開發具有靈敏、快速、可靠、特異性佳等優點的氯胺酮的檢測技術。

發明內容

本發明的目的是提供一種靈敏、快速、可靠、特異性佳等優點的氯胺酮的技術。

在本發明的第一方面，提供了一種核酸適體，所述的適體特異性結合于氯胺酮。

在另一優選例中，所述的特異性結合指所述適體結合于氯胺酮但不結合于以下任何一種物質：美沙酮、美沙芬、甲基苯丙胺、苯丙胺、MDMA、MDA、嗎啡、可待因、海洛因、福爾可定、單乙酰嗎啡、二氫可待因、二氫埃托菲、雷米替丁、哌替啶、芬太尼、曲馬多、右丙氧芬、納洛酮、納曲酮、烯丙嗎啡、可樂寧、洛非西丁、東莨菪堿、益安口服液、正通寧片、撲熱息痛、阿斯匹林、布洛芬、阿米替林、丙米嗪、氯丙嗪、異丙嗪、水合氯醛、安定、三唑侖、阿普唑侖、苯巴比妥、速可眠、異戊巴比妥、咖啡因、氟哌酸、先鋒IV、黃連素、乳糖、普魯卡因、康復新膠囊、水合氯醛、奧復沙星、非那西丁、去痛片、度冷丁、麻黃素、左旋麻黃素、右旋麻黃素、蒂巴因、四氫大麻酚、利多卡因、那可丁、丁丙諾啡、苯丙醇胺和苯乙胺。

在另一優選例中，所述的適體是通過SELEX技術，從ssDNA文庫中篩選獲得的單鏈核酸分子。

在另一優選例中，所述的適體包括DNA、RNA、或DNA/RNA雜合分子。

在另一優選例中，所述的適體的長度為30-100個堿基。

在另一優選例中，所述的適體為單鏈或雙鏈。