[發明專利]檢測副溶血性弧菌的方法及其單抗

有效

• 申請號: 201410609247.3
• 申請日: 2014-11-03
• 公開（公告）號: CN104360066A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 劉箐;丁承超
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;C07K16/12;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本發明屬于微生物檢測領域。具體而言，本發明涉及一種檢測副溶血性弧菌的方法、用于該方法的兩株抗副溶血性弧菌單克隆抗體以及產生該單克隆抗體的雜交瘤細胞。?

背景技術

副溶血性弧菌(Bibrio?parahemolyticus)又稱為副溶血弧菌，屬于弧菌屬，是一種常見的病原菌。副溶血性弧菌是一種嗜鹽性的革蘭氏陰性菌，主要的棲息地在海水中。如果食用了遭此菌污染的海鮮，會引發食物中毒；臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。?

目前副溶血性弧菌的檢測主要依賴于國標所規定的生化鑒定，其缺點是操作繁瑣、檢測周期較長，無法適應大量的樣品篩查。免疫學檢測是近年來出現的最快速、準確、穩定的快速檢測手段，但是檢測產品全部依賴進口，我國目前尚無擁有完全自主知識產權，且可運用于檢測實踐的快速檢測產品，該專利以副溶血性弧菌為檢測靶標，所要求保護的技術涉及副溶血性弧菌快速檢測產品。?

發明內容

本發明的目的是提供一種體外檢測副溶血性弧菌的方法。?

本發明的另一個目的是提供用于上述方法的兩株由同一次單克隆抗體制備過程產生的可特異性地結合于副溶血性弧菌不同抗原位點的單克隆抗體。?

本發明的另一個目的是提供產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞。?

本發明的第一方面是提供了一種體外檢測副溶血性弧菌的方法，包括以下步驟：?

(a)將待測樣品加樣于包被有捕捉抗體的固相載體，從而使待測樣品中的副溶血性弧菌與固相載體上的捕捉抗體結合，形成帶有“副溶血性弧菌-捕捉抗體”二元復合物的固相載體；所述的捕捉抗體是特異性地結合于副溶血性弧菌的單克隆抗體3G9F7D5C9，所述的單克隆抗體3G9F7D5C9由小鼠雜交瘤細胞系3G9F7D5C9，CGMCC?No.9010產生；?

(b)將檢測抗體加樣于(a)獲得的固相載體，從而形成帶有“檢測抗體-副溶血性弧菌-捕捉抗體”三元復合物的固相載體；所述的檢測抗體是特異性地結合于副溶血性弧菌的單克隆抗體3G9E9G3H7，所述的單克隆抗體3G9E9G3H7由小鼠雜交瘤細胞系3G9E9G3H7，?CGMCC?No.8003產生，且所述的單克隆抗體3G9E9G3H7攜帶一可檢測標記物；和?

(c)檢測三元復合物中的可檢測標記物，從而確定待測樣品中副溶血性弧菌的存在與否以及存在的量。?

在一優選例中，所述的固相載體為酶標反應板。?

在另一優選例中，所述的可檢測標記物為辣根過氧化物酶。?

本發明的第二方面是提供了一種免疫球蛋白，它是特異性地結合于副溶血性弧菌的單克隆抗體，它由小鼠雜交瘤細胞系3G9F7D5C9，CGMCC?No.9010所產生。?

本發明的第三方面是提供了一種產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞，它是小鼠雜交瘤細胞系3G9F7D5C9，CGMCC?No.9010。?

本發明的第四方面是提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于檢測副溶血性弧菌。?

本發明的第五方面是提供了一種免疫球蛋白，它是特異性地結合于副溶血性弧菌的單克隆抗體，它由小鼠雜交瘤細胞系3G9E9G3H7，CGMCC?No.8003所產生。?

本發明的第六方面是提供了一種產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞，它是小鼠雜交瘤細胞系3G9E9G3H7，CGMCC?No.8003。?

本發明還提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于檢測副溶血性弧菌。?

本發明各個方面的細節將在隨后的章節中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求的描述，本發明的特點、目的和優勢將更為明顯。?

附圖說明

圖1本發明的單克隆抗體的SDS-PAGE電泳圖?

Lane1：3G9F7D5C9，Lane2：3G9E9G3H7。?

具體實施方式

單克隆抗體?

本發明人的研究表明，以副溶血性弧菌作為免疫原，免疫Balb/c小鼠，分離純化得到兩株抗副溶血性弧菌單克隆抗體3G9E9G3H7和3G9F7D5C9，其抗體效價可達到1:100000，其能夠特異性、高效地與副溶血性弧菌結合，與單增李斯特、豬霍亂沙門、鼠傷寒沙門、腸炎沙門、福氏志賀、宋內氏志賀、鮑氏志賀、大腸桿菌O157:H7、阪崎腸桿菌、小腸耶爾森氏菌、肺炎鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌等共計77種病原細菌均無交叉反應。?