[發(fā)明專利]一種靶向編輯GS基因的多肽及其蛋白

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410608363.3
• 申請日: 2014-10-31
• 公開（公告）號: CN105622729B
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 柯瀟;雷剛;高小平
• 申請（專利權(quán)）人: 成都康弘生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K19/00;C12N15/11;C12N15/62;C12N15/85
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本發(fā)明提供一對核苷酸堿基編碼序列分別如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的短肽，其能夠高效的、特異性的識別宿主細(xì)胞GS基因上的兩段相鄰的核苷酸序列，從而準(zhǔn)確、高效的針對其中GS基因進(jìn)行靶向編輯，本發(fā)明中提供的短肽具有識別高效，特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高等優(yōu)點，通過其靶向修飾基因方法獲得的細(xì)胞株可以應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)，通過GS為篩選標(biāo)記的真核表達(dá)載體進(jìn)行外源蛋白的穩(wěn)定、高產(chǎn)單克隆的快速篩選。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，尤其涉及一種靶向編輯GS基因的多肽及蛋白。

背景技術(shù)

靶向基因組編輯技術(shù)是指通過將外源序列靶向染色體特定的位點，定點改造基因組DNA來改變基因組中的特定基因，實現(xiàn)定點插入一個基因或DNA元件，或?qū)⑻囟ɑ蛐蛄星贸哪康模员愀訙?zhǔn)確、深入地了解疾病發(fā)病機(jī)理和探究基因功能。早期的靶向基因組編輯技術(shù)主要依賴于基因同源重組(基因打靶，gene targeting)及體細(xì)胞核移植技術(shù)來完成對特定基因的改造，這一時期的主要技術(shù)手段包括：基因重組技術(shù)(Recombineering)，寡核苷酸介導(dǎo)的基因修復(fù)(single-stranded oligonucleotides)，腺病毒介導(dǎo)的靶向基因改造(AAV-mediated gene target)的突破，是靶向技術(shù)上的一大變革，但這些方法總體而言存在效率低，技術(shù)要求高而且成本高的缺點，近年來，包括鋅指核酸酶(zincfingernucleases，ZFN)在內(nèi)的新的靶向基因組編輯工具也不斷被研究和開發(fā)出來。靶向基因組編輯最重要的應(yīng)用表現(xiàn)在，一方面可以為醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究創(chuàng)造合適的動物模型，另一方面還可以在工業(yè)應(yīng)用上用來改良現(xiàn)有的宿主表達(dá)系統(tǒng)，比如CHO細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞，酵母細(xì)胞等，使其更有利于工業(yè)生產(chǎn)需求，因此基因靶向編輯技術(shù)一直是生命科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點。

哺乳動物細(xì)胞翻譯后再加工修飾產(chǎn)生的外源蛋白質(zhì)，在活性方面遠(yuǎn)勝于原核表達(dá)系統(tǒng)及酵母、昆蟲細(xì)胞等真核表達(dá)系統(tǒng)，因此哺乳動物細(xì)胞高效表達(dá)系統(tǒng)是蛋白基因表達(dá)中研究的熱點，目前研究及生產(chǎn)中最為常用的哺乳動物細(xì)胞為中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)，與其他表達(dá)系統(tǒng)相比，它具有許多優(yōu)點：①具有準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)錄后修飾功能,表達(dá)的糖基化藥物蛋白在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能方面最接近于天然蛋白分子；②具有產(chǎn)物胞外分泌功能,便于下游產(chǎn)物分離純化；③具有重組基因的高效擴(kuò)增和表達(dá)能力；④具有貼壁生長特性,且有較高的耐受剪切力和滲透壓能力，可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，表達(dá)水平較高；⑤CHO細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞(fibroblast)，很少分泌自身的內(nèi)源蛋白，利于外源蛋白的后分離[申燁華等，CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)研究新進(jìn)展，生物工程進(jìn)展，2000(20)4：23-25]，其在基因工程藥物生產(chǎn)中得到了廣泛的應(yīng)用，然而，外源基因在哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá)水平還受到很多因素的影響，層次也很廣泛，涉及復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后、翻譯和翻譯后等各級水平，因此在各個調(diào)控水平上對CHO細(xì)胞進(jìn)行改造，以獲得更高效表達(dá)的CHO表達(dá)系統(tǒng)對于生物藥品的開發(fā)和生產(chǎn)而言具備十分重要的意義。