[發明專利]黃瓜抗西瓜花葉病毒基因wmv的Indel標記及其應用有效
| 申請號： | 201410608279.1 | 申請日： | 2014-11-03 |
| 公開（公告）號： | CN104372085A | 公開（公告）日： | 2015-02-25 |
| 發明（設計）人： | 顧興芳;張圣平;苗晗;田桂麗;王燁;楊宇紅;謝丙炎 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蔬菜花卉研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129 | 代理人： | 吳泳歷 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 黃瓜 西瓜 花葉 病毒 基因 wmv indel 標記 及其 應用 | ||
1.一種與黃瓜抗西瓜花葉病毒基因wmv連鎖的Indel標記，其特征在于：所述標記的引物的核苷酸序列如下：
wmvIndel3-F/wmvIndel3-R：
AGGGTATCTTTGGATGTCAGAA/TGTGTTGTGTAGTGTAGGAAGG
所述引物擴增的與黃瓜感西瓜花葉病毒基因WMV連鎖的特征條帶為173bp，其核苷酸序列如Seq?ID?No.1所示；
所述引物擴增的與黃瓜抗西瓜花葉病毒基因wmv連鎖的特征條帶為169bp，其核苷酸序列如Seq?ID?No.2所示。
2.權利要求1所述Indel標記在篩選具有抗西瓜花葉病毒基因wmv的黃瓜種質資源中的應用，其特征在于，包括如下步驟：
(1)采用所述Indel標記的引物對待選黃瓜材料的基因組DNA進行PCR擴增；所述標記的引物的核苷酸序列如下：wmvIndel3-F/wmvIndel3-R：AGGGTATCTTTGGATGTCAGAA/TGTGTTGTGTAGTGTAGGAAGG；
(2)對擴增結果進行凝膠電泳檢測；
(3)從檢測結果中篩選出現與抗西瓜花葉病毒基因wmv連鎖的Indel標記特征條帶一致的材料，所述抗西瓜花葉病毒基因wmv連鎖的Indel標記特征條帶為169bp，其核苷酸序列如Seq?ID?No.2所示。
3.根據權利要求2所述的應用，其中，所述PCR擴增的反應體系為:1.5ng/μl?DNA模板，所述引物正向和反向各5ng/μl，0.5μl/μl?GoGreen?Master?Mix，其余為雙蒸水。
4.根據權利要求2或3所述的應用，其中，所述PCR擴增的反應程序為：94℃預變性4分鐘；94℃變性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒，35個循環；72℃保溫5分鐘，16℃保存。
5.根據權利要求2-4任一所述的應用，其中所述凝膠電泳檢測，指采用6％的非變性聚丙烯酰胺凝膠，于150V恒功率電泳分離，最后銀染顯色。
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