[發明專利]一種嗜熱鏈球菌ATCC 14485與蘆薈共發酵飲料的制備方法

無效

• 申請號: 201410607552.9
• 申請日: 2014-11-03
• 公開（公告）號: CN104382161A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 陳廷濤;辛洪波;王鑫
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: A23L2/38
• 分類號: A23L2/38;A23L2/84;G01N21/31
• 代理公司: 南昌市平凡知識產權代理事務所 36122
• 代理人: 夏材祥

技術領域

本發明主要涉及嗜熱鏈球菌ATCC?14485與蘆薈原汁共發酵條件的摸索，并對發酵液的抗氧化能力進行了測定和評價，主要用于今后相關蘆薈洗液和蘆薈飲品的研制，本發明具體涉及一種嗜熱鏈球菌ATCC?14485與蘆薈共發酵飲料的制備方法。

背景技術

????蘆薈屬百合科草本植物，蘆薈凝膠中含有豐富的多糖、蛋白質、氨基酸、維生素、活性酶及對人體十分有益的微量元素。它具有多重功效，美白、保濕、控油、除痘等作用。并且蘆薈提取液常添加在食品、藥品、牙膏及化妝品中，不僅具有抗細菌、防止皮膚干裂或油脂分泌多、對治療雀斑、青春痘和防止脫發、去頭屑、消炎、愈合傷口、免疫、抗腫瘤都有極好的療效。

益生菌是指一類對人和動物有益的細菌，指投入后通過改善宿主腸道菌群生態平衡而發揮有益作用，提高宿主健康水平和使宿主健康達到最佳狀態的活菌制劑及其代謝產物，各種食品中更是添加多種益生菌，增強食品營養價值。

嗜熱鏈球菌被認為是“公認安全性”成分，廣泛用于生產一些重要的發酵乳制品，包括酸奶和奶酪，能生產胞外多糖、細菌素和維生素等多種營養物質。

本發明采用嗜熱鏈球菌ATCC?14485與蘆薈原汁進行共發酵，探索了發酵液的抗氧化能力，并進行了評價。

發明內容

本發明的目的是提供一種嗜熱鏈球菌ATCC?14485與蘆薈共發酵飲料的制備方法，對研制前期的蘆薈發酵液最佳條件進行探索，并進行抗氧化性的測定，評價蘆薈發酵液產品研制過程中具有的優勢。

本發明所述制備方法包括下列步驟：

1、蘆薈的選擇和制備：采選新鮮、飽滿、肉質肥厚的蘆薈葉片，剔除帶有病斑、軟腐的葉片，葉片均重300~400?g；葉片采用75%?酒精進行表面消毒，去除蘆薈葉表面皮層，采用榨汁機榨汁，分裝后，6000?rpm/min離心10?min，再次分裝，制成蘆薈原汁，所述蘆薈是庫拉索蘆薈。

2、采用巴氏消毒法將蘆薈原汁滅菌，55?℃處理30?min，4?℃保存備用。

3、嗜熱鏈球菌ATCC?14485的活化

A、從-80?℃冰箱取出嗜熱鏈球菌ATCC?14485，按培養基體積的5%接種于5?mL?MRS培養基中，于37?℃恒溫培養箱中培養過夜；

B、取過夜培養的嗜熱鏈球菌ATCC?14485，按培養基體積的5%接種5?mL?MRS培養基中，二次活化。

4、最佳發酵條件的確定

A、設定發酵溫度梯度分別為25?℃、30?℃、37?℃、42?℃，在上述不同的發酵溫度條件下取5?mL蘆薈原汁，加入蘆薈原汁體積的10%脫脂乳和2%葡萄糖，嗜熱鏈球菌ATCC?14485接種量為蘆薈原汁體積的5%，發酵20?h，得到不同溫度條件下的蘆薈發酵液；

B、取上述各蘆薈發酵液，加生理鹽水按10¹～10⁶比例稀釋，取50　μＬ涂板，過夜培養，進行活菌計數，確定最佳發酵溫度；

C、在最佳發酵溫度的條件下，設定蘆薈原汁PH梯度為3、4、5、6、7、8、9，在上述不同的PH條件下取5?mL蘆薈原汁，加入蘆薈原汁體積的10%脫脂乳和2%葡萄糖，嗜熱鏈球菌ATCC?14485接種量為蘆薈原汁體積的5%，發酵20?h，采用PH計調節PH；

D、取上述各蘆薈發酵液，加生理鹽水按10¹～10⁶比例稀釋，取50　μＬ涂板，過夜培養，進行活菌計數，確定最佳發酵PH。

5、在最佳發酵溫度和PH條件下發酵培養：在步驟4確定最佳PH和最佳溫度后，取5?mL蘆薈原汁，加入蘆薈原汁體積的10%脫脂乳和2%葡萄糖，接種蘆薈原汁5%的嗜熱鏈球菌ATCC?14485，發酵48?h，10000??rpm/min離心10?min，重新分裝，獲得嗜熱鏈球菌ATCC?14485蘆薈發酵液，4?℃保存備用。

6、蘆薈發酵液抗氧化性指標的測定和后期評價

?A、DPPH自由基清除能力的測定

?取2?ml蘆薈發酵液，加入2?ml?DPPH乙醇溶液，黑暗下室溫反應30min，然后用等體積的三氯甲烷抽提，取上清517?nm測OD，對照為去離子水加DPPH溶液；

B、羥基自由基清除能力的測定

?取2?mmol/L的硫酸亞鐵溶液1?mL,?6?mmol/L過氧化氫1?mL,?6?mmol/L水楊酸1?mL,?并加入蘆薈發酵液1?mL，靜置?30?min，以蒸餾水為參比，在510?nm處測定吸光度，計算羥自由基的清除率；