[發明專利]一種基于PCR-RFLP鑒定金銀花品系雞爪花和大毛花的方法有效
| 申請號： | 201410599280.2 | 申請日： | 2014-10-30 |
| 公開（公告）號： | CN104388545A | 公開（公告）日： | 2015-03-04 |
| 發明（設計）人： | 黃璐琦;袁媛;蔣超;胡添源 | 申請（專利權）人： | 中國中醫科學院中藥研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 100700 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 pcr rflp 鑒定 金銀花 品系 雞爪花 大毛 方法 | ||
1.一種用于鑒定金銀花品系雞爪花和大毛花的試劑盒，含有由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對，以及限制性內切酶AvaII或其同裂酶。
2.權利要求1所述的試劑盒在鑒定或輔助鑒定待測金銀花為雞爪花品系還是大毛花品系中的應用。
3.一種鑒定或輔助鑒定待測金銀花為雞爪花品系還是大毛花品系的方法，包括如下步驟：
(1)以待測金銀花的基因組DNA為模板，采用由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對進行PCR擴增；
(2)采用限制性內切酶AvaII對步驟(1)所得PCR產物進行完全酶切；
(3)按照如下方法確定所述待測金銀花的品系：若經步驟(2)酶切獲得的DNA片段為如下(a1)，則所述待測金銀花為或候選為雞爪花品系；若經步驟(2)酶切獲得的DNA片段為如下(a2)或(a3)，則所述待測金銀花為或候選為大毛花品系：
(a1)大小分別為66bp和181bp的兩個DNA片段；
(a2)大小為247bp單一DNA片段；
(a3)大小為66bp、181bp和247bp的三個DNA片段。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述步驟(3)中，大小為66bp的DNA片段的核苷酸序列為序列表中序列3的第1-66位，大小為181bp的DNA片段的核苷酸序列為序列表中序列3的第67-247位，大小為247bp的DNA片段的核苷酸序列為序列表中序列4。
5.一種用于鑒定金銀花品系雞爪花和大毛花的引物對，為由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對。
6.權利要求5所述的引物對在鑒定或輔助鑒定待測金銀花為雞爪花品系還是大毛花品系中的應用。
7.一種鑒定或輔助鑒定待測金銀花為雞爪花品系還是大毛花品系的方法，包括如下步驟：
(1)以待測金銀花的基因組DNA為模板，采用權利要求5所述的引物對進行PCR擴增，得到PCR產物；
(2)按照如下方法確定所述待測金銀花的品系：若所述PCR產物為如下(b1)，則所述待測金銀花為或候選為雞爪花品系；若所述PCR產物為如下(b2)或(b3)，則所述待測金銀花為或候選為大毛花品系：
(b1)單一PCR產物：核苷酸序列為序列表中序列3所示的DNA片段；
(b2)單一PCR產物：核苷酸序列為序列表中序列4所示的DNA片段；
(b3)兩種PCR產物：核苷酸序列為序列表中序列3所示的DNA片段，以及核苷酸序列為序列表中序列4所示的DNA片段。
8.根據權利要求3、4或7所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，進行所述PCR擴增時采用的退火溫度為54-60℃。
9.權利要求1所述試劑盒的制備方法，包括將序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子以及限制性內切酶AvaII或其同裂酶分別單獨包裝的步驟。
10.權利要求5所述引物對的制備方法，包括將序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子分別單獨包裝的步驟。
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