[發明專利]一種發形霞水母超氧化物歧化酶及其編碼基因與應用有效
| 申請號： | 201410597250.8 | 申請日： | 2014-10-29 |
| 公開（公告）號： | CN104480079B | 公開（公告）日： | 2017-10-20 |
| 發明（設計）人： | 張黎明;柳國艷;阮增良;周永紅;王倩倩;王蓓蕾;尹慢慢;劉丹;張慧 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍第二軍醫大學 |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70 |
| 代理公司： | 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙)31268 | 代理人： | 趙青 |
| 地址： | 200433 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 發形霞 水母 超氧化物歧化酶 及其 編碼 基因 應用 | ||
1.一種發形霞水母超氧化物歧化酶，其特征在于，所述的發形霞水母超氧化物歧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.一種如權利要求1所述的發形霞水母超氧化物歧化酶的編碼基因，其特征在于，該編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.一種如權利要求1所述的發形霞水母超氧化物歧化酶的制備方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：
(A)構建發形霞水母觸手組織cDNA文庫；
(B)對上述發形霞水母觸手組織cDNA文庫重組克隆的序列進行測定和分析，獲得權利要求2所述的編碼發形霞水母超氧化物歧化酶的核苷酸序列；使用PCR方法從發形霞水母觸手組織CDNA文庫中對該序列進行擴增；
(C)構建發形霞水母超氧化物歧化酶的表達質粒，重組工程菌；
(D)發形霞水母超氧化物歧化酶的表達；
(E)重組發形霞水母超氧化物歧化酶的純化。
4.根據權利要求3所述的發形霞水母超氧化物歧化酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(C)中的構建發形霞水母超氧化物歧化酶的表達質粒，重組工程菌，具體步驟為：
a)設計并合成PCR引物如下：
上游引物如SEQ ID NO:3所示，
下游引物如SEQ ID NO:4所示，
PCR反應條件為：95℃保溫5min；95℃保溫30sec，55.5℃保溫30sec，68℃保溫1min，35個循環；68℃保溫5min；
b)酶切回收后的PCR產物及pET24a原核表達質粒；
c)利用兩個酶切位點將編碼序列連接到pET24a載體上，構建重組表達質粒，然后轉化到大腸桿菌Rosetta獲得重組工程菌。
5.根據權利要求3所述的發形霞水母超氧化物歧化酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(D)中的發形霞水母超氧化物歧化酶的表達條件為：12℃、0.5mM IPTG、150rpm環境中誘導10小時。
6.一種如權利要求1所述的發形霞水母超氧化物歧化酶在制備抗氧化藥物、抗輻射藥物、皮膚防護劑、食品防腐劑或抗衰老藥物中的應用。
7.一種如權利要求2所述的發形霞水母超氧化物歧化酶的編碼基因在制備抗氧化藥物、抗輻射藥物、皮膚防護劑、食品防腐劑或抗衰老藥物中的應用。
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