[發明專利]木薯綿粉蚧特異性SS-COI引物對及快速PCR檢測方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201410597048.5
• 申請日: 2014-10-30
• 公開（公告）號: CN104293970A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 張桂芬;王玉生;田虎;萬方浩;王瑞;冼曉青
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體地，本發明涉及木薯綿粉蚧特異性SS-COI引物對及快速PCR檢測方法和試劑盒。

背景技術

木薯綿粉蚧(Cassava?mealybug)Phenacoccus?manihoti?Matile-Ferrero，屬半翅目、粉蚧科、綿粉蚧屬，是一種世界性檢疫害蟲，2011年6月20日中華人民共和國農業部和國家質量監督檢驗檢疫總局聯合發布公告將其列入《中華人民共和國進境植物檢疫性有害生物名錄》(農業部國家質檢總局公告第1600號)，并要求各出人境檢驗檢疫機構依法加強對該蟲發生國家或地區寄主植物的檢驗檢疫。木薯綿粉蚧嗜食木薯尤其是甜木薯，并常在木薯上暴發成災，而在其寄主植物上迄今尚未有成災的報道。已有的研究表明，木薯綿粉蚧的寄主植物有15科27種加3屬，包括農作物、園林植物、雜草和果樹等，嚴重受害的植物有大戟科的木薯、一品紅、木薯膠、異葉南洋杉、飛揚草、苦竹等；馬齒莧科的菜用土人參、馬齒莧等；菊科Aspilla屬植物、勝紅薊、金腰箭屬的苦草Sydrella?nodiflora、紫莖澤蘭、飛機草等；椴樹科的黃麻屬植物；茜草科的傘房花耳草；蕁麻科的甜麻；莧科莧屬植物；薔薇科的木瓜；茄科的番茄、馬鈴薯、辣椒等；豆科的花生、大豆等；錦葵科的秋葵、棉花等；薯蕷科薯蕷屬的一種植物Dioscera?sp.、甘薯等；鳳梨科的菠蘿；蕓香科的柑橘；葫蘆科的南瓜等。而且，隨著木薯綿粉蚧入侵區域的逐漸擴大和定居時間的推移，其寄主植物的種類和危害程度有進一步增加的趨勢。木薯綿粉蚧營孤雌生殖，主要以雌性成蟲和若蟲群居在寄主植物的幼嫩部位進行刺吸為害，為害部位包括嫩枝、嫩葉、嫩梢、花芽和葉柄以及窖儲塊根、塊莖等，受害木薯葉片發黃、卷曲、脫落，受害植株長勢衰弱，生長緩慢或停滯，失水干枯，亦可造成葉片大量脫落、生長點叢生、枝條畸形、嫩枝枯死；而成蟲和若蟲分泌的蜜露誘發的煤污病不僅嚴重影響植物的光合作用，還可導致葉片枯萎脫落，嚴重時可造成植株成片死亡；此外，木薯綿粉蚧還可傳播重大檢疫性病原物非洲木薯花葉病毒。如上世紀70年代木薯綿粉蚧傳入非洲剛果，并迅速擴散至非洲所有的木薯種植區，成為非洲木薯的主要害蟲，導致木薯減產84％，每年造成的經濟損失高達20億美元；又如，在我國的鄰邦泰國，2009年初發現木薯綿粉蚧，5月份其危害面積就達16萬公頃，僅20個府的損失就有28億銖(約合8629.6萬美元)，用于防治木薯綿粉蚧的費用達6500萬銖(約合200萬美元)。

木薯綿粉蚧原產于南美洲中部，是當地木薯上的一種重要害蟲，后隨寄主植物及其產品傳播擴散，陸續在西非、中非、東非發現，給非洲木薯產業造成巨大損失。2008年(或許更早)傳入泰國，目前已在亞洲的泰國、老撾、柬埔寨、越南、印度尼西亞，非洲的安哥拉、貝寧、布隆迪、剛果、科特迪瓦、岡比亞、加納、幾內亞、幾內亞比紹、肯尼亞、馬拉維、莫桑比克、尼日利亞、盧旺達、塞內加爾、塞拉利昂、蘇丹、坦贊尼亞、扎伊爾、中非共和國，南美洲的阿根廷、玻利維亞、巴西、哥倫比亞、巴拉圭、圭亞那等31個國家和地區嚴重發生，是威脅世界木薯生產安全的重大入侵害蟲。經多方考證，目前我國尚未發現木薯綿粉蚧，然而，木薯綿粉蚧在我國廣東、廣西、海南等省的絕大部分地區以及福建、江西、貴州、云南等省份部分地區高度適生，在重慶、四川等部分地區中度適生。因此，盡快研發木薯綿粉蚧快速檢測技術，加強對木薯綿粉蚧的監測檢測，是保障我國木薯及蔬菜花卉產業和水果、棉花產業健康發展的必要前提。

木薯綿粉蚧為小型昆蟲，營孤雌生殖，雌性成蟲卵圓形，活體粉紅色，被白色蠟粉，體長1.17-2.37mm；卵長0.31-0.42mm，初孵若蟲體長0.49-0.75mm，淡粉紅色，略微透明，肉眼難以發現。雌性成蟲將卵產于生殖孔附近的棉絮狀的卵囊內，初孵若蟲活躍，從卵囊爬出后短時間內即可取食危害，并可遷移至鄰近植株。而加強檢疫和監測必需建立一套快速準確的分子檢測方法。目前國際上用于木薯綿粉蚧鑒定的方法主要有：1)形態特征鑒定。但目前國內針對木薯綿粉蚧尚沒有任何標準的檢測方法，并且基于形態學特征的《木薯綿粉蚧檢疫鑒定方法》的行業標準尚未納入制定規劃。