[發(fā)明專利]檢測(cè)致病菌的電化學(xué)傳感器、制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410590803.7
• 申請(qǐng)日: 2014-10-29
• 公開（公告）號(hào): CN104297309A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛峰;滕軍;蔣原;陳偉;曾德新;蔣魯巖;袁芳;夏曉莉;邵景東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心
• 主分類號(hào): G01N27/26
• 分類號(hào): G01N27/26;G01N27/327
• 代理公司: 南京匯盛專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

1.檢測(cè)致病菌的電化學(xué)傳感器，包括工作電極，其特征在于所述工作電極為表面修飾有寡聚核苷酸探針2的波碳電極；所述傳感器還包括工作液1和工作液2；所述工作液1為標(biāo)記有抗致病菌抗體的納米磁珠分散液；所述工作液2為標(biāo)記有抗致病菌抗體和寡聚核苷酸探針1的金納米粒子分散液；所述寡聚核苷酸探針1的5’端修飾有亞甲藍(lán)，寡聚核苷酸探針2的3’端修飾有氨基，所述寡聚核苷酸探針1和2的堿基序列互補(bǔ)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測(cè)致病菌的電化學(xué)傳感器，其特征在于所述寡聚核苷酸探針1的核苷酸序列為5’-GTGCACGGTACGCGAATCGG-3’，所述寡聚核苷酸探針2的核苷酸序列5’-CCGATTCGCGTACCGTGCAC-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述檢測(cè)致病菌的電化學(xué)傳感器，其特征在于所述致病菌為空腸彎曲菌。

4.權(quán)利要求1所述檢測(cè)致病菌的電化學(xué)傳感器的制備方法，其特征在于所述表面修飾有寡聚核苷酸探針2的波碳電極采用如下方法制備：在波碳電極表面沉積氧化石墨烯薄膜，在所述氧化石墨烯薄膜上修飾寡聚核苷酸探針2。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述檢測(cè)致病菌的電化學(xué)傳感器的制備方法，其特征在于所述表面修飾有寡聚核苷酸探針2的波碳電極采用如下方法制備：將波碳電極用氧化鋁粉末拋光，在乙醇和水中進(jìn)行超聲清洗；將氧化石墨烯懸濁液滴加在超聲清洗后的波碳電極表面，得到表面沉積有氧化石墨烯薄膜的波碳電極；表面沉積有氧化石墨烯薄膜的波碳電極在N-羥基丁二酰亞胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶液中進(jìn)行活化，然后在活化后的波碳電極表面滴加寡聚核苷酸探針2溶液，所述寡聚核苷酸探針2的3’端修飾有氨基、核苷酸序列為5’-CCGATTCGCGTACCGTGCAC-3’。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述檢測(cè)致病菌的電化學(xué)傳感器的制備方法，其特征在于所述工作液1采用如下方法制備：納米磁珠采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基丁二酰亞胺活化，然后加入抗空腸彎曲菌抗體進(jìn)行反應(yīng)，得到標(biāo)記有抗空腸彎曲菌抗體的納米磁珠分散液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述檢測(cè)致病菌的電化學(xué)傳感器的制備方法，其特征在于所述工作液2采用如下方法制備：

（1）在醋酸溶液中加入三(2-羧乙基)膦和3’端修飾有巰基、5’端修飾亞甲藍(lán)的生物探針，所述生物探針的核苷酸序列為5’-GTGCACGGTACGCGAATCGG-3’，進(jìn)行反應(yīng)；

（2）在步驟（1）反應(yīng)所得混合物中，加入金納米粒子進(jìn)行反應(yīng)；

（3）在步驟（2）所得反應(yīng)混合物中，加入抗空腸彎曲菌抗體進(jìn)行反應(yīng)；然后加入三磷酸脫氧腺苷和牛血清白蛋白進(jìn)行反應(yīng)；

（4）步驟（3）所得反應(yīng)混合物離心，取沉淀重懸于磷酸鹽緩沖液中，得到標(biāo)記有抗致病菌抗體和寡聚核苷酸探針1的金納米粒子分散液。

8.采用權(quán)利要求1-3之一所述電化學(xué)傳感器檢測(cè)致病菌的方法，包括如下步驟：

（1）將工作液1與含有不同濃度致病菌的溶液混合，分離納米磁珠并懸浮于緩沖液中，得到納米磁珠分散液；

（2）在納米磁珠分散液中加入工作液2，進(jìn)行反應(yīng)；

（3）將步驟（2）獲得的混合物滴加到工作電極上進(jìn)行反應(yīng)，清洗，在工作電極兩端施加電壓，檢測(cè)電流信號(hào)，得到致病菌濃度與電流的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（4）將待測(cè)樣品按照步驟（1）-（3）進(jìn)行檢測(cè)，將得到的電流代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到待測(cè)樣品中致病菌的濃度。