[發明專利]一種復合菌制劑及其應用

有效

• 申請號: 201410584300.9
• 申請日: 2014-10-27
• 公開（公告）號: CN104388338A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 宋曉玲;黃倢;楊冰;許華;李玉宏
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/18;A23K1/16;A23K1/175;C12R1/10;C12R1/08;C12R1/125
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

技術領域

本發明屬于益生菌篩選制備技術領域，具體涉及一種復合菌制劑及其應用。

背景技術

人類面臨人口、資源、環境三大問題，開發利用海洋已成為沿海各國的國家戰略。隨著海洋捕撈資源的急劇衰減，海水養殖已成為國際社會為滿足人類日益增長的蛋白質需求普遍采納的主要舉措。發展可持續的水產養殖已成為世界共同關注的主題，水產養殖產品作為高品質蛋白來源已得到國際社會的廣泛認同和肯定。作為世界水產品生產大國，中國水產養殖總產量占全世界總產量的70％以上，連續多年居世界首位，對外貿易占農產品出口凈收入的50％以上，出口額連續多年居大宗農產品首位。

近年來，病害問題已成為限制海水養殖業持續發展的重要因素，造成了重大的經濟損失，而且逐年攀升。每年養殖對蝦、魚類的病害造成了百億元以上的經濟損失，而盲目使用藥物等造成了養殖環境惡化和沿海環境污染。殘留藥物不僅威脅國民健康，也嚴重影響水產品的出口創匯。人們逐漸開始從生態平衡的角度制定新的水產健康養殖方案，益生菌的使用就是其中重要的措施之一。

水產養殖動物腸道不僅是飼料消化和營養吸收的場所，也是動物機體免疫防御的關鍵部位。改善動物腸道微生物的群落結構對于提高飼料營養價值和利用效率，增強動物抗病力意義重大。有益微生物水產養殖動物腸道中的作用效果包括：形成有益微生物屏障、增加飼料的消化和利用、分泌抗菌素、刺激和活化免疫系統、與病原微生物的生存競爭等。但目前對蝦養殖生產中應用的芽孢桿菌菌株較少，且存在著菌種生物學性狀平平，活菌數量偏低，作用效果不穩定等不足，特別是還沒有抗對蝦病毒病菌株的應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種復合菌制劑及其應用，即來源于對蝦消化道的地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的復合菌株制劑，上述菌株組合使用可增強對蝦細胞和體液的免疫水平，特別是提高對蝦抗病毒感染能力。

本發明的復合菌制劑，包括有地衣芽孢桿菌(Bacillus?lincheniformis)LV005菌株、短小芽孢桿菌(Bacillus?pumilus)LV012菌株和枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)LV023菌株。

地衣芽孢桿菌(Bacillus?lincheniformis)LV005菌株于2013年6月16日在武漢的中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為：CCTCC?M?2013262。

短小芽孢桿菌(Bacillus?pumilus)LV012菌株于2013年6月16日在武漢的中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為：CCTCC?M?2013263。

枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)LV023菌株于2013年6月16日在武漢的中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為：CCTCC?M?2013264。

其中混合菌液中，活菌總濃度≥10⁹CFU/mL；且地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌優選為1：1：1。

本發明的復合菌制劑，是將地衣芽孢桿菌LV005發酵菌液、短小芽孢桿菌LV012發酵菌液、枯草芽孢桿菌LV023發酵菌液混合后制備的。

其中地衣芽孢桿菌LV005發酵菌液制備方法如下：從-80℃保存的菌種挑取少量劃線于2216E固體培養基，在37℃培養24h獲得單菌落，取一單菌落接種于2216E培養液中，37℃搖瓶培養24h獲得種子液，再把種子液接種于地衣芽孢桿菌發酵液中發酵培養，發酵溫度控制在37℃；當發酵液OD600值達到1.5～1.7時，終止發酵，獲得發酵菌液；發酵液中地衣芽孢桿菌LV005活菌濃度≥109CFU/mL。

地衣芽孢桿菌LV005的發酵液成分質量百分比為：蛋白胨，1.5％；酵母粉，0.4％；蔗糖，1.0％；氯化鈉，2.5％；磷酸高鐵，0.001％；硫酸鎂，0.02％；硫酸錳，0.05％。

短小芽孢桿菌LV012發酵菌液制備方法如下：從-80℃保存的菌種挑取少量劃線于2216E固體培養基，在37℃培養24h獲得單菌落，取一單菌落接種于2216E培養液中，37℃搖瓶培養24h獲得種子液，再把種子液接種于地衣芽孢桿菌發酵液中發酵培養，發酵溫度控制在37℃；當發酵液OD600值達到1.2～1.4時，終止發酵，獲得發酵菌液；發酵液中短小芽孢桿菌LV012活菌濃度≥10⁹CFU/mL。