[發明專利]一種測定嗜鹽古生菌噬菌體SNJ1效價的引物及方法

有效

• 申請號: 201410583708.4
• 申請日: 2014-10-27
• 公開（公告）號: CN104328217A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 梅運軍;何聰聰;黃詠馳
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 武漢荊楚聯合知識產權代理有限公司 42215
• 代理人: 王健;劉牧

1.一種測定嗜鹽古生菌噬菌體SNJ1效價的引物，其特征在于：

所述引物包括：

上游引物：5’-ACG?AGT?GGC?GGC?AGG?TTT-3’、

下游引物：5’-TCC?CGA?TGA?TGC?GGT?TGT-3’。

2.一種利用權利要求1所述引物測定嗜鹽古生菌噬菌體SNJ1效價的方法，其特征在于：

該方法是指：先將待測噬菌體保存液與上游引物5’-ACG?AGT?GGC?GGC?AGG?TTT-3’、下游引物5’-TCC?CGA?TGA?TGC?GGT?TGT-3’、定量PCR試劑盒以及無菌水混合進行定量PCR反應，再于反應結束后測定Ct值，最后根據Ct值計算出嗜鹽古生菌噬菌體SNJ1的效價。

3.根據權利要求2所述的一種測定嗜鹽古生菌噬菌體SNJ1效價的方法，其特征在于：

所述方法依次包括以下步驟：

標準曲線的建立：先取已知濃度的嗜鹽古生菌噬菌體SNJ1的標準保存液用無菌水依次稀釋10倍、100倍、10³倍、10⁴倍、10⁵倍，再向PCR擴增管中加入稀釋后的標準保存液、上游引物、下游引物、定量PCR試劑盒以及無菌水后進行定量PCR反應，并于反應結束后測定Ct值，最后以稀釋倍數的倒數的常用對數為橫坐標，以對應的Ct值為縱坐標擬合標準曲線方程；

噬菌體效價的測定：向PCR擴增管中加入待測噬菌體保存液、上游引物、下游引物、定量PCR試劑盒以及無菌水后進行定量PCR反應，并于反應結束后測定Ct值，然后將測定的Ct值帶入標準曲線方程中計算出嗜鹽古生菌噬菌體SNJ1的效價。

4.根據權利要求2或3所述的一種測定嗜鹽古生菌噬菌體SNJ1效價的方法，其特征在于：

所述定量PCR反應條件為：先于95℃下變性4min，然后依次進行34個PCR循環，最后于10℃停止PCR反應，其中，每個所述PCR循環都依次包括95℃變性15s、56℃退火30s、72℃延伸30s。

5.根據權利要求3所述的一種測定嗜鹽古生菌噬菌體SNJ1效價的方法，其特征在于：

所述標準曲線的建立步驟中，稀釋后的標準保存液的體積為1μL，上游引物、下游引物的濃度均為5μmol/L，它們的體積均為1μL，定量PCR試劑盒為2×Taq?PCRMasterMix，其體積是10μL，無菌水的體積為7μL；

所述噬菌體效價的測定步驟中，待測噬菌體保存液的體積為1μL，上游引物、下游引物的濃度均為5μmol/L，它們的體積均為1μL，定量PCR試劑盒為2×Taq?PCRMasterMix，其體積是10μL，無菌水的體積為7μL。